Триходерма для чего применяется
Триходерма для чего применяется
В настоящее время существует потребность получения новых биологически активных веществ, которые способны восстанавливать клетки и ткани, подвергшиеся воздействию вредных факторов окружающей среды. Данная проблема особенно актуальна в экологически опасных районах страны, где в среду поступает большое количество загрязнителей.
Одним из таких токсичных загрязнителей, по данным National Oceanicand Atmospheric Administration USA (NOAA), является пирен. Он образуется в результате различных процессов горения. Попадая в организм, пирен может распространяться в почках, печени. Исследования на животных показали, что пирен может вызывать нефропатию, изменения в крови, а также проблемы с воспроизводством потомства.
Несмотря на то, что различными авторами накоплено большое количество данных по разным аспектам жизнедеятельности и функционирования грибов Trichoderma, и они являются продуцентами метаболитов широкого спектра действия, вопрос об их использовании в качестве медицинских агентов остается открытым и может представлять интерес в дальнейших научных исследованиях. Исследования в этой области ведутся достаточно активно; постоянно обнаруживаются новые метаболиты с полезными свойствами [4, 8].
В связи с вышесказанным целью настоящей работы явилось характеристика биологической активности жидкого препарата Trichoderma в опытах in vitro и in vivo. Для достижения цели проводили скрининг цитотоксической и органотоксической активности наиболее известных штаммов T. harzianum 206(2) и T. harzianumIhI на клетках линии HeLa и здоровых самцах сертифицированной линии Webster. Также была оценена степень совместного влияния токсина пирена и жидкого препарата Trichoderma на состояние внутренних органов мышей.
Материалы и методы исследования
Скрининг на тест-организмах
Опухолевые клетки HeLa были предоставлены лабораторией молекулярной фармакологии кафедры биохимии КФУ от к.б.н., доцента Фаттаховой А. Н.
Клетки HeLa (1⋅10 5 клеток/мл) поддерживались на минимальной среде (MEM), содержащей дополнительно 10 % эмбриональной телячьей сыворотки и 100 000 МЕ пенициллина при 37 °C во влажной атмосфере с 5 % CO2. Культуральная среда менялась каждые 3 дня. Клетки промывали 2 раза фосфатно-солевым буфером PBS (37 мм NaCl, KCl 2,7 мм; 8,1 мм NaH2PO4) перед добавлением свежей среды [6].
Раствор пирена. Полициклический ароматический углеводород пирен был приобретен у Sigma-Aldrich (Steinheim, Германия). 500 мг пирена растворяют в 25 мл оливкового масла до конечной концентрации 20 мг/мл.
Методы, используемые в данной работе, предполагают полное отсутствие пропагул и наличия «нативных» метаболитов в культуральной жидкости исследуемого штамма микромицета. Поэтому нами был выбран метод ультрафильтрации.
Исследуемые штаммы Trichoderma сеяли в колбы со стерильной жидкой средой Чапека (50 мл). На одни сутки помещали в термостат при 28 °С. Культивировали на качалке 5 дней со скоростью 128 об./мин, 28 °С. После чего нативную культуральную жидкость освобождали от мицелия ультрафильтрацией.
Определение цитотоксичности in vitro. К 50 мкл суспензии клеток HeLa добавляли 25 мкл, 50 мкл или 100 мкл культуральной жидкости (КЖ) T. harzianum 206(2) и T. harzianumIhI. Инкубировали смесь при 37 °С в течение 30 минут. Жизнеспособность оценивали с использованием камеры Горяева методом исключения красителя трипанового синего.
На 15-е сутки мышей убивали, вскрывали и отбирали внутренние органы: кожу в месте введения препаратов, мозг, печень, селезенку, почки, кишечник и сердце для проведения гистологического анализа. Ткани фиксировали в растворе формалина и метанола, обезвоживали и пропитывали парафином. Из парафиновых блоков делали срезы толщиной 4-6 мкм. Гистологические препараты готовили по стандартной схеме.
Полученные препараты исследовали при помощи световой микроскопии.
Статистический анализ данных. Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета программ MicrosoftExcel. Уровень значимости, примененный в работе, равен P = 0,05. Если выборки имели нормальное распределение, доверительный интервал строился по средним значениям. По этой же причине для сравнения полученных данных использовались параметрические критерии значимости: критерий Стьюдента, основан на сравнении средних и дисперсий [1].
Результаты исследования и их обсуждение
Грибы рода Trichoderma обладают высокой физиологической активностью и подавляют рост целого ряда патогенных грибов и грамположительных бактерий [9, 10]. В связи с этим представляет интерес исследование антибиотической активности штаммов грибов рода Trichoderma в отношении возбудителей болезней человека и животных, а также может представлять интерес в отношении токсичности и к опухолевым клеткам [8].
Определение цитотоксичности жидкого препарата Trichoderma по отношению к опухолевым клеткам HeLa in vitro. Антибиотические соединения способны не только тормозить рост микроорганизмов, но и способны удерживать рост опухолевых клеток.
Для дальнейших исследований цитотоксичности культуральной жидкости в отношении клеток HeLa мы отобрали штаммы Т. citrinoviride 203, Т. harzianum 206(2), T. harzianumIHI и T. spp306, T. asperellum 202, T. citrinoviride 321 с высокой антибиотической активностью.
Влияние КЖ Trichoderma на опухолевые клетки HeLa исследовали в одной концентрации. Объем суспензии клеток: объем КЖ 1:1. В качестве контроля использовали фосфатный буфер (ФCБ) и среду культивирования микроорганизмов.
В результате исследования было показано, что только жидкие препараты штаммов T. harzianum 206(2) и T. harzianumIHI обладали слабым цитотоксическим эффектом (рис. 1).
Рис. 1. Выживаемость опухолевых клеток НеLa в реакционной смеси, содержащей дозы жидкого препарата Trichoderma
В связи с вышеизложенным следующим этапом наших исследований было изучение влияния подкожного введения жидкого препарата Trichoderma, а затем пирена мышам линии SwissWebster.Таким образом моделировали патологические изменения.
Влияние пирена и жидкого препарата Trichoderma на состояние кожи мышей в месте введения препаратов. На фотографии среза кожи интактных мышей хорошо заметны слои эпидермиса и дермы кожи (рис. 2а). Волосяные фолликулы хорошо выражены и содержатся в большом количестве.
а б
Под воздействием пирена слой эпидермиса уменьшался примерно в 3 раза по сравнению с контролем. Количество волосяных фолликулов также сильно снижено (рис. 2б). У мышей 3-й группы наблюдается увеличение размера эпидермиса, а также количества волосяных фолликул (рис. 2в). В роговом слое видны сформировавшиеся клетки, это указывает на то, что идет хорошая дифференцировка клеток.
На препарате кожи мыши 3б группы виден толстый роговой слой, в эпидермисе большее количество слоев эпидермиса. Это может свидетельствовать о том, что идет регенерация клеток кожи и вследствие чего восстанавливается ее структурное строение (рис. 2г).
Влияние пирена и жидкого препарата Trichoderma на состояние печени мышей в месте введения препаратов. На фотографии среза печени контрольной (интактной) мыши хорошо видна дольчатая структура органа, гепатоциты имеют неправильную многоугольную форму. Гепатоциты располагаются друг к другу рядом, образуя при этом печеночные балки или так называемые трабекулы. Клетки и печеночные балки ровные, симметричны относительно кровеносных капилляров. Щелевидные пространства равномерные, хорошо просматриваются (рис. 3а).
а б
Также отмечено увеличение количества ретикуло-эндотелиальных клеток, но они небольшого размера. Заметно ослабевает сосудорасстройство в виде застойного полнокровия синусоидальных клеток и оттека перисоидального пространства.
В печени мышей 3б группы, получавшей жидкий препаратT. harzianum IhI,баночное строение более выражено по сравнению с группой 2. Гепатоциты имеют большие размеры и более выражены по структурным признакам, многие из них имеют темноокрашенные цитоплазмы. Значительно увеличено содержание гепатоцитов с двумя ядрами (
36,33 %). В структуре ядра гепатоцитов увеличено содержание эохроматина, большинство ядер содержит одно крупное, реже несколько мелких ядрышек, располагаемых в центральной области клетки. В печени мышей 3б группы наблюдалось увеличение размеров клеток ретикулоэндотелия и их численности. Также заметно ослабевает сосудорасстройство в виде застойного полнокровия.
Таким образом, при применении жидкого препарата Trichoderma в течение 7 дней после воздействия гепатоксина выявлена тенденция к восстановлению печеночной ткани: дольчатая структура органа восстанавливается; вокруг кровеносных сосудов заметны обширные участки пролиферирующих ярко окрашенных гепатоцитов, имеющих более плотную структуру.
Влияние пирена и жидкого препарата Trichoderma на состояние мозга мышей в месте введения препаратов.
Известно, что некоторые метаболиты грибов способны проникать через гематоэнцефалический барьер.
При изучении срезов мозга, в первую очередь, обращают внимание на отсутствие хроматолиза и центральное расположение ядра. В мозге мышей 2-й группы обнаружены слившиеся нейроны и единичные нейроны с эксцентрично расположенным ядром, хроматолиза нет.
Заключение
Установлено, что только жидкие препараты T. harzianum 206(2) и T. harzianumIhI обладали слабым цитотоксическим эффектом по отношению к опухолевым клеткам Hela в опытах invitro. Введение жидких препаратов T.harzianum 206(2) и Т. harzianumIhI нивелирует токсическое действие пирена на кожу и печень мышей, возможно опосредованно с иммунной системой. Выявлена тенденция к восстановлению тканей.
Таким образом, впервые показана возможность использования метаболитов культуральной жидкости грибов рода Trichoderma для снижения токсичного действия пирена на стоке мышей Webster путём вероятного усиления их иммунной системы. Кроме того, тестирование влияния метаболитов грибов рода Trichoderma на различных объектах является обязательным этапом при создании любого биологического препарата. Будут продолжаться вестись более подробные исследования.
Рецензенты:
Абрамова З.И., д.б.н., профессор кафедры биохимии Казанского (Приволжского) федерального университета, г. Казань;
Багаева Т.В., д.б.н., зав. кафедрой физиологии растений Казанского (Приволжского) федерального университета, г. Казань;
Канарский А.В., д.т.н., профессор кафедры пищевой биотехнологии Казанского национального исследовательского технологического университета, г. Казань.
ТОП средств от грибка на ногтях
Грибок ногтей является достаточно распространенной проблемой – с диагнозом онихомикоз столкнулось 10-20% населения. Данной болезнью можно заразиться в салоне красоты, в бассейне или в душе фитнес-клуба. Ногти, пораженные грибком, приобретают серо-желтый цвет, становятся тусклыми и утолщаются. Также они могут истончаться и крошиться. При этом присутствует ярко выраженный зуд и жжение. Как результат – психологический и физический дискомфорт.
Такое заболевание, как онихомикоз, имеет не только косметический недостаток. Грибок развивается в подногтевом пространстве и может проникнуть в кровоток. Возбудитель распространяется по организму, что становится причиной общей аллергизации. Именно по этой причине нужно начинать лечение при появлении первичной симптоматики и продолжать терапию до полного отрастания здоровой ногтевой пластины.
Многие не знают, как выбрать таблетки от грибка ногтей на ногах. Все достаточно просто – нужно отдавать предпочтение препаратам от известных фармакологических компаний. Также следует опираться на степень прогрессирования онихомикоза и область поражения ногтевой пластины. Предлагает рейтинг лучших лекарств от грибка. Мы собрали наиболее эффективные препараты, которые быстро устраняют проблему, не вызывая побочных реакций при соблюдении рекомендаций производителя.
Классификация препаратов от грибка на ногтях
Перед тем, как начать лечение, следует провести диагностику, чтобы определить возбудителя заболевания. Дело в том, что грибок бывает нескольких видов и по-разному реагирует на действующие вещества, входящие в состав. Также существуют лекарства, обладающие системным действием, комплексно воздействуя на проблему.
Группы препаратов
Причины возникновения грибка ногтей
Онихомикоз сопровождается активным отслоением чешуек кожи и ногтя, которые в большом количестве остаются на разных поверхностях. Инфицирование происходит в момент соприкосновения фрагментов эпителия с кожей здорового человека. Именно поэтому так часто заражение происходит в местах общественного пользования (салоны красоты, сауны, бани и пр.).
Опаснее всего деревянные предметы, например скамейки и настилы. Это обусловлено тем, что грибок проникает под чешуйки и размножается во влажной среде. Патогенные микроорганизмы также передаются через кафель и ковровые покрытия. Недопустимо общее пользование постельным бельем, полотенцами и обувью.
Рейтинг препаратов
Лучшие средства от грибка ногтей на ногах подобраны в зависимости от эффективности, степени выраженности побочных реакций, стадии прогрессирования болезни и спектра действия активных компонентов. Также лекарства должны быть удобны в применении и доступны по цене.
№1 – «Экзодерил» (Sandoz, Австрия)
Противогрибковое средство, предназначенное для наружного использования. Разработано на основе такого активного вещества, как нафтифин гидрохлорид. Это лучшее средство от грибка на ногах благодаря тому, что эффект достигается практически моментально. Форма выпуска – флакон-капельница по 10, 20 и 30 мл.
Механизм действия «Экзодерила» заключается в ингибировании вещества, которое уничтожает патогенные микроорганизмы на клеточном уровне. Раствор 1% концентрации эффективен против дерматофитов и дрожжевых грибов. Препарат действует комплексно, предотвращая вторичное бактериальное инфицирование.
Способ применения – локальная обработка. Дозировка устанавливается индивидуально и зависит от имеющихся показаний. Могут возникнуть побочные реакции в виде жжения, покраснения и сухости кожи в местах нанесения.
Производитель: Sandoz [Сандоз], Австрия
№2 – «Лоцерил» (Galderma, Франция)
Средство от грибка, которое находится на 2-м месте рейтинга. Препарат представлен в виде 5% раствора аморолфина гидрохлорида и предназначен для наружного использования для обработки пораженных поверхностей. Обладает выраженным фунгицидным (уничтожает клетки грибка) и фунгистатическим (замедляет рост патогена) действием.
Раствор назначается при онихомикозах при поражении 2/3 ногтевой пластины. Широко используется для профилактики поражения здоровых ногтей грибком. Можно применять в том случае, если болен один из членов семьи, чтобы предотвратить инфицирование.
Противопоказано использовать в период беременности и лактации. Также не рекомендуется наносить при повышенной чувствительности к аморолфину.
При использовании раствора недопустимо пользоваться косметическим лаком. Пилками, которыми обрабатываются пораженные грибком ногти недопустимо применять для здоровых ногтевых пластин.
Также «Лоцерил» выпускается в форме лака для ногтей. Лекарственное средство эффективно справляется с проблемой при комплексном использовании. Во время лечение недопустимо пользоваться косметическим лаком для ногтей. На ногтевой пластине постоянно должна быть плотная пленка лечебного лака. При ее повреждении следует обновлять слой, чтобы исключить вероятность проникновения воздуха и влаги внутрь.
Производитель: Galderma [Лаборатория Галдерма], Франция
№3 – «Офломил» (Glenmark, Индия)
Лекарственный лак для ногтей, в состав которого входит аморолфина гидрохлорид. Противогрибковый препарат наносится на пораженную ногтевую пластину. Это лучшее средство от грибка ногтей, который дает быстрый и стойкий эффект. «Офломил» не только устраняет грибок, но и восстанавливает ногтевую ткань, улучшая эстетические показатели.
Активное вещество лака «Офломил» повреждает цитоплазматическую мембрану гриба, нарушая биосинтез стеролов. Препарат обладает высокой активностью против дерматофитов, дрожжевых и диморфных грибов.
При нанесении на ногти действующее вещество проникает через ногтевую пластину в ногтевое ложе в течение 24 часов. Необходимая концентрация сохраняется в ногтевой пластине на протяжении 7-10 суток, что позволяет устранить симптомы онихомикоза и остановить прогрессирование заболевания.
Производитель: Glenmark Pharmaceuticals [Гленмарк Фармасьютикалз], Индия
№4 – «Микодерил» (Фармстандарт-Лексредства, Россия)
Учитывая отзывы, раствор «Микодерил» является хорошим средством от грибка. Активный компонент – нафтифина гидрохлорид, относится к аллиламинам. Действует путем снижения образования эргостерола, который является одним из составляющих клеточной стенки гриба. Обладает широким спектром активности против различных патогенных микроорганизмов, вызывающих вторичное инфицирование при микозах.
Оказывает комплексное воздействие, эффективно решая проблему онихомикоза. Симптомы заболевания быстро угасают уже после первого использования раствора. Рецидивы, при соблюдении рекомендаций по использованию препарата, практически полностью исключены.
Не рекомендуется применять беременным и кормящим грудью женщинам. Абсолютным противопоказанием является повышенная чувствительность к нафтифину. Недопустимо наносить на раневую поверхность.
Для достижения заявленного производителем эффекта нужно пройти полный курс лечения. Если терапию прервать до того момента, пока не отрастет пораженный ноготь, то болезнь может возобновиться. Можно использовать для борьбы с онихомикоза и грибковым поражением кожного покрова.
Производитель: Фармстандарт-Лексредства, Россия
№5 – «Микозан» (Serrix, Нидерланды)
Местное противогрибковое средство, которое при нанесении на ноготь образует пленку, препятствующую размножению возбудителя болезни. Действующее вещество – фильтрат фермента ржи, воздействует на проблему особым образом.
В набор входит сыворотка в тубе, оснащенная кисточкой-аппликатором, одноразовые пилочки (10 шт.) и инструкция по применению. Перед использованием рекомендуется ознакомиться с рекомендациями производителя.
Производитель: Serrix [Серрикс], Нидерланды
№6 – «Кандид» (Glenmark, Индия)
Крем для наружного нанесения, который содержит клотримазол. Активное вещество нарушает синтез эргостерола (составляющее клеточной мембраны грибов). Увеличивает концентрацию перекиси водорода до критического уровня, что также приводит к гибели возбудителя заболевания. Выпускается в форме порошка и раствора для наружного нанесения.
Допустимо использовать во 2 и 3 триместре беременности только в том случае, если польза для матери будет превышать потенциальные риски для плода. Крем может вызывать такие побочные действия, как аллергические реакции, зуд, сыпь и шелушение. Не рекомендуется использовать при повышенной чувствительности к клотримазолу.
Производитель: Glenmark Pharmaceuticals [Гленмарк Фармасьютикалз], Индия
№7 – «Нитрофунгин» (Teva, Чешская Республика)
Раствор для наружного использования, который разработан на основе хлорнитрофенола. Обладает выраженным противогрибковым и антибактериальным действием в отношении грамотрицательных и грамположительных бактерий.
Наносится на поврежденные участки с помощью ватного тампона 2-3 раза в день. Лечение необходимо продолжать до того момента, пока клиническая симптоматика онихомикоза полностью не исчезнет. В дальнейшем, чтобы предотвратить рецидив, нужно использовать «Нитрофунгин» 2-3 раза в неделю. В профилактических целях достаточно наносить 1-2 раза в неделю на протяжении месяца.
Производитель: Teva [Тева], Чешская Республика
№8 – «Мизол» (Эвалар, Россия)
Раствор для наружного использования, который содержит нафтифина гидрохлорид. Противогрибковое средство относится к группе аллиламинов. Механизм действия заключается в снижении выработки эргостерола, который является составляющим клеточной стенки гриба.
Для того чтобы достичь терапевтического эффекта, нужно пройти полный курс лечения. Терапию недопустимо прерывать до тех пор, пока симптомы заболевания не будут устранены. Препарат не подходит для детей и беременных женщин. Также нельзя использовать при повышенной чувствительности к нафтифину.
Производитель: Эвалар, Россия
№9 – «Батрафен» (Sanofi Aventis, Германия)
Лак для ногтей на основе циклопирокса. Противогрибковое средство обладает широким спектром действия. Эффективность основана на ингибировании и выведении компонентов, которые необходимы для поддержания жизнедеятельности патогенных микроорганизмов, которые являются возбудителем заболевания.
Лак «Батрафен» оказывает выраженное антибактериальное действие по отношению к большинству грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов. Препарат наносится непосредственно на пораженные ногтевые пластины. Для профилактики распространения онихомикоза рекомендуется обрабатывать все ногти.
В процессе лечения могут возникать побочные реакции, такие как зуд и жжение, шелушение и гиперемия кожного покрова. Не рекомендуется использовать при беременности и в период лактации ввиду того, что клинический опыт для данных групп пациентов отсутствует.
Производитель: Sanofi Aventis [Санофи-Авентис], Германия
№10 – «Микоспор» (Bayer, Германия)
Мазь для наружного нанесения на основе бифоназола и мочевины. Противогрибковая мазь оказывает широкий спектр антимикотического действия. Фунгицидный эффект достигается при достижении должной концентрации после нанесения через 6 часов. Резистентные штаммы грибов встречаются только в редких случаях.
Производитель: Bayer [Байер], Германия
№11 – «Клотримазол» (Медана Фарма Терполь Груп, Польша)
Раствор «Клотримазол» разработан на основе одноименного действующего вещества. В малой концентрации останавливает размножение патогенных микроорганизмов, в большой дозировке – приводит к их гибели. Повышает уровень перекиси водорода до критических отметок, что является гарантией полного разрушения грибковых клеток. В таком случае рецидивы сведены к минимуму.
Можно использовать для лечения онихомикозов, грибковых поражений кожи и эритразмы. Дозировка подбирается индивидуально в зависимости от степени прогрессирования болезни. Для предотвращения развития рецидивов следует доводить лечение до конца.
Не рекомендуется применять вместе с сиролимусом и такролимусом. В противном случае происходит повышение концентрации действующих компонентов в крови. Недопустимо использовать в первом триместре беременности.
Производитель: Медана Фарма Терполь Груп Акционерное Общество, Польша
Выводы
Многие интересуются, можно ли самому заниматься лечением грибка на ногтях. В ТОПе представлены лучшие средства от грибка, которые действенны против онихомикоза. Препараты не имеют серьезных противопоказаний и при соблюдении инструкции по применению практически не вызывают побочных реакций.
Важно начать лечение на начальной стадии прогрессирования болезни, чтобы исключить развитие осложнений. В противном случае без консультации специалиста не обойтись. На начальных этапах развития онихомикоза достаточно использовать раствор или лак. Далее не обойтись без мазей и пероральных лекарственных средств. Обратите внимание, что таблетки могут негативно отразиться на состоянии ЖКТ (желудочно-кишечного тракта).