Что значит ифа в медицине

—Перенесенная ВЭБ-инфекция

+Хроническая ВЭБ-инфекция

—Реактивация инфекции

+Лимфома Беркитта——+++Назофарингеальная карцинома—

Наличие anti-VCA, но не anti-EBNA — недавняя инфекция, наличие обоих видов антител — давняя инфекция. Однако результаты лабораторных исследований необходимо учитывать в комплексе с данными клинической картины.

Использование различных антител для диагностики первичной или перенесенной ВЭБ инфекции показано в табл. 2 [6].

Таблица 2.

Использование различных видов антител для диагностики текущей или перенесенной ВЭБ-инфекции

Для диагностики ВЭБ CDC рекомендует определять anti-VCAIgM и IgG антитела и ранний антиген EA-D для диагностики текущей или недавней инфекции.

2. Применение ИФА в диагностике эндокринных заболеваний

Для диагностики эндокринных заболеваний применяется исследование уровня гормонов. В этом случае используется количественный иммуноферментный анализ. Для количественной оценки содержания антигена иммуноферментная тест-система содержит ряд стандартных раст­воров определяемого вещества с известными концентрациями. По результатам анализа стан­дартных растворов строят калибровочную кри­вую, отражающую зависимость оптической плотности от концентрации антигена. По калибровочной кривой, зная оптическую плотность опытной пробы, можно рассчитать концентра­цию определяемого антигена. При использовании очищенного антигена его содержание может быть выражено в единицах концентрации — массовая единица/единица объема [11, 12].

Рассмотрим применение методов ИФА на примере диагностики заболеваний щитовидной железы (ЩЖ). Заболевания ЩЖ являются весьма распространенными и занимают после сахарного диабета второе место среди всех эндокринных заболеваний. Появление методов иммуноферментного анализа явилось важной вехой в эндокринологии. Методы ИФА позволяют получить важную информацию о развитии патологии на доклиническом этапе и, благодаря этому, значительно повысить эффективность лечения.

В арсенале лабораторных методов диагностики in vitro заболеваний ЩЖ сегодня насчитывается девять наиболее часто выполняемых тестов [13, 14]. Это определение концентрации в сыворотке крови тиреотропного гормона гипофиза (ТТГ), общего и свободного тироксина (общ.Т4 и св.Т4), общего и свободного трийодтиронина (общ.Т3 и св.ТЗ), тироксинсвязывающих белков. Помимо определения тиреоидных гормонов наиболее значимыми в лабораторной диагностике являются определение аутоантител к тканям ЩЖ: антител к тиреоглобулину (Ат-ТГ), антител к тиреопероксидазе (Ат-ТПО), антител к ТТГ-рецепторам.

Ключевыми гормональными маркерами заболеваний ЩЖ являются ТТГ и свТ4. Уровень ТТГ в сыворотке крови — стратегический маркер функционального состояния ЩЖ. Тестпервого уровня, ТТГ, необходим для дифференцировки состояния эутиреоза от гипо- и гипертиреоза.

Показаниями к назначению определения в крови содержания ТТГ являются:

— скрининговое исследование ТТГ (его рекомендуется проводить не только у беременных и новорожденных, но и у взрослых в возрасте старше 35 лет (женщины) и 50 лет (мужчины) с интервалом в 5 лет);

— диагностика нарушений функций ЩЖ;

— подтверждение диагноза и дифференцировка форм центрального и периферического гипо- или гипертиреоза;

— скрининг врожденного гипотиреоза 15.

Содержание в крови ТТГ у здоровых лиц колеблется от0.30 до 4.0 мМЕ/л(эутиреоидный диапазон).

Клиническое значениеопределения уровня ТТГ в диагностике заболеваний тиреоидного статуса:

— при первичном гипотиреозе наблюдается снижение концентрации тиреоидных гормонов Т3 и Т4 и патологическая секреция ТТГ;

— при вторичном гипотиреозе прекращается секреция ТТГ гипофизом, ЩЖ получает малое количество стимулов для синтеза Т3 и Т4;

— для дифференциации первичного и вторичного гипотиреоза используется ТРГ-стимулирующий тест (определяется тиреотропин-рилизинг гормон) или используются наборы ТТГ с чувствительностью не менее 0,01 мМЕ/л;

— при гиперфункции ЩЖ частично или полностью подавляется синтез ТТГ;

— у беременных и женщин, принимающих контрацептивы, наблюдается нормальный уровень ТТГ и повышенные уровни Т3 и Т4.

Патологический уровень ТТГ (ниже 0,1 и выше 10 мМЕ/л) параллельно с повышенными уровнями Т4 и (или) Т3 явно указывает на гипертиреоз, пониженный уровень Т4 подтверждает гипотиреоз [18, 19]. Интерпретация результатов ТТГ показана в табл. 3.

Таблица 3.

Интерпретация результатов определения ТТГ

ТТГ (мМЕ/л)ДиагнозМенее 0,1Гипертиреозс подавленной регуляцией гипофизарно-тиреоидной системы (при повышенных концентрациях Т4 и Т3)0,1-0,2Нижняя пограничная концентрация. Необходимо определение ТТГ с чувствительностью до 0,01мМ/л для подтверждения или исключения латентного или манифестного гипеотиреоза0,3-3,5Эутиреоидный диапазон3,5-10,0Верхняя пограничная концентрация.Необходимо проведение ИФА на ТТГ с чувствительностью до 0,01мМ/л для подтверждения или исключения латентного или манифестного гипотиреозаБолее 10,0Первичный гипотиреоз;

опухоли гипофиза, синтезирующие ТТГ

Тествторого уровня, св.Т4, необходим для подтверждения наличия гипо- и гипертиреоза. Тироксин (Т4) продуцируется только клетками ЩЖ. Лишь незначительная часть (0,03% Т4) находится в свободной форме, но именно он обуславливает биологическую активность гормона.Поэтому диагностически важным является определение концентрации св.T4.Концентрация св.Т4 не зависит от концентрации связывающих белков и составляет11-25 пмоль/л(10-27 пг/мл).

Показаниями к назначению определения в крови содержания св.Т4 являются:

— диагностика гипер- или гипофункции ЩЖ;

— наблюдение за состоянием больного во время лечения.

Клиническое значениеопределение уровня св.Т4 в диагностике заболеваний ЩЖ:

— при гипертиреозе концентрации св.Т4 повышена, концентрация ТТГ— понижена;

— на начальной стадии гипотиреоза концентрация св.Т4 понижается раньше концентрации общего Т4. Диагноз подтверждается в случае повышения концентрации ТТГ [20, 21]. Интерпретация результатов определения св.Т4 показана в табл. 4.

Таблица 4.

Интерпретация результатов определения св.Т4

На концентрацию общего и свободного Т4 могут влиять следующие факторы:

Трийодтиронин (Т3).Около 80% общего количества Т3 образуется в результате дейодирования Т4 в периферических тканях (печени и почках), а 20% секретируется ЩЖ. Т3 связывается с рецепторами клеток-мишеней со сродством, в 10 раз превышающим сродство Т4. Содержание св.Т3 составляет около 0,3% от общего содержания гормона в сыворотке.

Содержание в крови общего Т3 у здоровых лиц находится в диапазоне1.8-2,8 нмоль/л(0.8-2,0 нг/мл).

Концентрация св.Т3 не зависит от концентрации связывающих белков и составляет4,49-9,3 пмоль/л (2,5-5,8 пг/мл).

Показанием к назначению определения в крови содержания Т3 является: подозрение на гипотиреоз (при нормальном уровне Т4) или при нарушениях связывающей способности белков сыворотки.

Клиническое значениеопределения уровня Т3 в диагностике заболеваний ЩЖ:

— дифференциальная диагностика Т3 гипертиреоза (10%) случаев;

— диагностика начальной стадии гиперфункции;

— рецидив гипотиреоза, симптоматическое повышение уровня Т3;

— острый гипертиреоз после подавляющей (супрессивной) терапии.

У пожилых людей (у мужчин старше 60 и у женщин старше 70 лет) уровни Т3 на 10-50% ниже, чем у молодых. Это происходит в результате снижения скорости периферического расщепления Т4 в Т3. Кроме того, причинами снижения уровня Т3 могут быть следующие факторы: тяжелые общие заболевания; принятие лекарственных препаратов (глюкокортикоидов, пропранолола, амиодарона).

Во время беременности (особенно в 3-м триместре) концентрация Т3 может превышать в 1,5 раза нормальные значения. После родов уровень нормализуется в течение недели.

При дефиците йода наблюдается компенсаторное повышение уровней Т3. При гипотиреозе уровни Т3 могут длительное время находиться в районе нижнего предела нормы, так как повышенное периферическое превращение Т4 в Т3 компенсирует потерю Т4. Диагностическая ценность определения концентрации Т3 приведена в табл. 5.

Таблица 5.

Диагностическая ценность определения концентрации св.Т3

Маркеры аутоиммунной патологии — тиреоид-специфические антитела.

Большинство гипер- и гипофункций ЩЖ являются аутоиммунными заболеваниями. Наиболее хорошо известными компонентами ЩЖ (антигенами), к которым развиваются подобные иммунные реакции и вырабатываются антитела, являются тиреоглобулин (ТГ), фермент тиреоидная пероксидаза (ТПО) и рецепторы к ТТГ. Многие пациенты имеют только повышенные уровни анти-ТПО, некоторые только анти-ТГ. Частота определения отдельных видов антител у здоровых людей составляет: Ат-ТГ — 1%, Ат-ТПО — 5%, Ат к рецепторам ТТГ — 2%. При аутоиммунном тиреоидите Ат-ТГ обнаруживаются у 70% пациентов, Ат-ТПО — у 95% и Ат к рецепторам ТТГ — у 10%. При диффузном токсическом зобе Ат-ТГ положительны у 30% больных, Ат-ТПО — у 70% и Ат к рецепторам ТТГ — у 90%.

Антитела к тиреоглобулину, предшественнику Т3 и Т4, связывают тиреоглобулин, нарушая синтез гормонов и вызывая тем самым гипотиреоз. Определение Ат-ТГ проводится для оценки выраженности аутоиммунных реакций при заболеваниях ЩЖ. Антитела к тиреоглобулину, как и тиреоглобулин, являются маркерами рецидива дифференцированного рака щитовидной железы у больных после тиреоидэктомии.

Антитела к ТПО. Тиреоидная пероксидаза является основным компонентом тиреоидного микросомального антигена. В настоящее время обнаружена корреляция между содержанием Ат-ТПО в сыворотке и степенью уменьшения эхогенности тканей ЩЖ при ультразвуковом исследовании, что указывает на наличие диффузной лимфоидной ткани.

Показаниями к назначению определения в крови содержания Ат-ТПО и Ат-ТГ являются:

— хронический тиреоидит (типа Хашимото);

— гипертиреоз у новорожденных;

— гипертиреоз (Базедова болезнь)

— эутиреоидный зоб (компенсированная стадия Базедовой болезни).

Антитела к ТТГ-рецепторам (общие и стимулирующие). Причиной развития диффузного токсического зоба (болезнь Грейвса) считается появление в крови больных особых иммуноглобулинов — аутоантител, специфически конкурирующих с ТТГ за связывание с рецепторами тиреоцитов и способных оказывать на щитовидную железу стимулирующее влияние, аналогичное ТТГ. Выявление высокого уровня аутоантител к ТТГ-рецепторам в крови больных с болезнью Грейвса является прогностическим предвестником рецидива заболевания (чувствительность — 85% и специфичность — 80%). Аутоантитела к ТТГ-рецепторам в повышенных количествах могут быть обнаружены у больных с зобом Хашимото. Уровень аутоантител прогрессивно снижается при медикаментозном лечении этого заболевания или после тиреоидэктомии, что может быть использовано для контроля эффективности проводимого лечения [22, 23].

3. Применение ИФА в диагностике онкозаболеваний

Незаменим иммуноферментный анализ также при иммунодиагностике онкологических заболеваний с помощью опухолевых маркеров. Опухолевые маркеры — это вещества, образуемые опухолевыми клетками и секретируемые в биологические жидкости, в которых они могут быть количественно определены неинвазивными методами. Измерение уровня опухолевых маркеров широко используется в диагностике, лечении, мониторинге состояния онкологических больных и доклинического выявления рецидивов. К опухолевым маркерам относится большая группа факторов, концентрация которых в биологических жидкостях зависит от развития злокачественного процесса. От соединений, продуцируемых нормальными клетками, опухолевые маркеры отличаются либо качественно (опухолеспецифические), либо количественно (ассоциированные с опухолью, но в низких концентрациях присутствующие и в нормальных клетках). Часть опухолевых маркеров секретируется в кровь, благодаря чему их концентрацию можно определить с помощью иммуноферментного анализа. Известен целый ряд веществ, которые могут рассматриваться как опухолевые маркеры при различных локализациях злокачественного процесса. К ним относятся ассоциированные с опухолью антигены или антитела к ним, гормоны, ферменты, продукты обмена, цитокины. В клинической практике используют около двух десятков веществ, обладающих достаточной диагностической значимостью и рекомендованных к использованию в качестве опухолевых маркеров [24].

Показания к использованию опухолевых маркеров

— Скрининг — принято считать, что на данный момент ни один из известных опухолевых маркеров не обладает достаточными специфичностью и чувствительностью, чтобы рекомендовать его для скрининга. Однако в отдельных странах проводятся скрининговые программы для выявления некоторых опухолей, относительно часто встречающихся в данном регионе. Например, в Китае определяется α-фетопротеин (AFP) для скрининга гепатоцеллюлярной карциномы, в США с 1992г. проводится скрининг рака простаты у мужчин старше 50 лет с использованием простатоспецифического антигена (PSA) и пальцевого ректального исследования предстательной железы 28. В России, согласно Приказу МЗ РФ от 20.02.2008г. № 80н «О проведении дополнительной диспансеризации работающих граждан», проводится скрининг на СА-125 (маркер рака яичников) и PSA лиц старше 40 лет [29].

— Диагностика — опухолевые маркеры могут являться эффективным и экономически целесообразным методом в комплексе диагностических процедур злокачественных новообразований. Комбинация нескольких маркеров может быть использована для выявления первичной локализации опухоли при метастазировании. Также опухолевые маркеры могут быть использованы в дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных заболеваний. Степень повышения концентрации многих маркеров может быть использована для оценки стадии заболевания [30, 31].

— Прогноз — уровень маркера до начала лечения или концентрация и скорость ее изменения после первичной терапии соответствуют прогнозу. Это следует из того факта, что уровень опухолевого маркера, как правило,соответствует массе опухоли. Агрессивная, быстро растущая опухоль, с множественными метастазами продуцирует очень высокий уровень маркера, указывающий на плохой прогноз. Хорошо дифференцированная опухоль, менее агрессивная, продуцирует меньшее количество маркера [32].

— Оценка эффективности терапии и мониторинг — это самая важная область применения опухолевых маркеров. Профиль концентрации маркеров наиболее быстро и ясно отражает эффективность проведенной хирургической операции, различных схем терапии, указывает на полную или частичную ремиссию, позволяет выявлять рецидивы задолго до их клинического проявления. Быстрое снижение концентрации опухолевого маркера до нормального уровня после проведенной операции или другого лечения свидетельствует об успешности проводимой терапии. Отсутствие снижения уровня маркера до нормы после первой линии терапии может указывать на то, что лечение было неуспешным или имело лишь частичный успех. Продолжительно сохраняющийся низкий уровень маркера свидетельствует о периоде ремиссии. Последовательное повышение концентрации говорит о рецидиве заболевания. Повышение может предшествовать клиническому прогрессированию опухоли, подтвержденному другими методами, на 3-12 месяцев. Снижение уровня опухолевого маркера после периода повышения, связанного с развитием рецидива, свидетельствует об ответе на вторую линию терапии. Повышенная концентрация маркера после лечения, скорее всего, означает, что опухоль резистентна к используемым методам лечения и прогноз неблагоприятный, либо требуется изменить схему лечения [27, 28].

Динамика уровня маркера представляет больший интерес, чем единичное значение. Очень важно правильно соблюдать интервалы времени анализа. Обязательно необходимо иметь образцы, взятые до начала лечения. Как правило, рекомендуемые интервалы взятия проб для анализа не реже 1 раза в месяц в течение первого года после лечения, далее 1 раз в 2 месяца в течение второго года после лечения, затем 1 раз в 3 месяца в течение третьего года наблюдения.

Уровень практически любого из опухолевых маркеров повышается при различных доброкачественных заболеваниях. Влияние сопутствующих заболеваний обязательно должно учитываться при интерпретации результатов тестирования.

Очень важной составляющей, облегчающей интерпретацию результатов и повышающей диагностическую значимость опухолевых маркеров, является метод определения. Особенно важна при наблюдении динамики воспроизводимость результатов. Коэффициент вариации не должен превышать 5%. Референсные интервалы измеряемых концентраций опухолевых маркеров могут варьировать в зависимости от производителя тест-наборов. Значения, полученные с помощью реагентов различного производства, не могут быть взаимозаменяемы. В лабораторный отчет необходимо включать используемый метод определения.

В качестве примера применения ИФА в диагностике онкозаболеванийрассмотрим определение простатоспецифического антигена (PSA). PSA — является наиболее эффективным опухолевым маркером рака предстательной железы. По химической природе — это гликопротеин, секретируемый клетками эпителия канальцев предстательной железы. Он относится к семейству калликреиновых сериновых протеаз, является химотрипсиноподобной гликопротеазой. Синтез этого белка контролируется андрогенами через рецепторы эпителиальных клеток протоков предстательной железы. Синтезированный PSA поступает непосредственно в кровяное русло, где находится в свободном и связанном состояниях. Малигнизация, воспалительные процессы, гипертрофия и гиперплазия предстательной железы сопровождаются значительным повышением уровня PSA в сыворотке крови. Исследование PSA применяют для диагностики, мониторинга лечения рака предстательной железы и дифференциальной диагностики рака и доброкачественной гиперплазии предстательной железы.

Показаниями к исследованию PSA являются:

Для дифференцирования РПЖ от ДГПЖ определяют соотношение свободного PSA к общему — PSAсвоб./PSAобщ. х 100%. При РПЖ концентрация общего PSA увеличивается значительнее, поэтому соотношение снижается. При ДГПЖ соотношение PSAсвоб./PSAобщ. выше. Пороговое значение соотношения PSAсвоб./PSAобщ. составляет 0,1-0,15 (или 10-15%). Таким образом, PSAсвоб./PSAобщ. >15% — доброкачественные состояния; PSAсвоб./PSAобщ.

Источник