Ттсс микробиология что это

Третий тип секреторной системы

Секреция белков-эффекторов происходит через шприцеподобную структуру, состоящую из 20 различных по структуре белков. При контакте с клеткой-мишенью белки полимеризиуются и образуют канал, пронизывающий насквозь внутреннюю и наружную мембраны, а на поверхности формируют длинную пилеподобную структуру. Шприцеподобный канал в области наружной мембраны стабилизируется кольцеподобной структурой с большой центральной порой. Когда инжектосома сформирована, секретируемый белок с сигнальным пептидом (20 аминокислот) на N-конце связывается с цитоплазматическим шапероном, транспортируется по каналу ТТСС и впрыскивается в клетку-мишень.

Кодирующие ТТСС гены способны к одновременной горизонтальной внутривидовой и межвидовой передаче. Посредством ТТСС Yersinia pestis, Salmonella enterica, Shigella flexneri, Escherichia coli, Chlamydia trachomatis секретируют белки, играющие ведущую роль в патогенезе вызываемых ими заболеваний.

Четвертый тип секреторной системы

Четвертый тип секреторной системы (ЧТСС) отвечает за перенос вирулентной ДНК и за секрецию факторов патогенности, проявляет сходство с системой конъюгации бактерий и эволюционно произошел из нее.

Посредством четвертой секреторной системы B. pertussis секретирует пертуссин (Pt1), Legionella pneumophila – Dot/Icm. Эта система секреции описана у Brucella suis, Bartonella henselae (болезнь кошачьих царапин), Helicobacter pylori.

Источник

Микрообъемная биохимическая идентификация энтеробактерий

В лабораторной практике идентификация видов и биоваров энтеробактерий проводится по их фенотипическим признакам. Основным и наиболее сложным разделом идентификации является изучение биохимических свойств бактерий. Повсеместно за рубежом и во многих лабораториях нашей страны биохимическая идентификация бактерий осуществляется микрообъемной технологией. При этом используются специальные микрообъемные тест-системы для автоматических бактериологических анализаторов или различные коммерческие тест-системы биохимической идентификации бактерий для визуального учета. Микрообъемная технология наиболее экономична, проста, пригодна для автоматизации и стандартизации исследований.

Коммерческие микрообъемные тест-системы по устройству представлены двумя группами: содержащими субстрат реакции в питательной среде или в шаблоне-носителе. Результаты биохимических тестов учитываются визуально, вид микроорганизма устанавливается с помощью таблицы идентификации, кодов (профилей) или компьютерных программ.

Тест-система Rapid 20E (Bio Merieux) предназначена для биохимической идентификации энтеробактерий и других грамотрицательных палочек в течение 4 ч. Состоит из прозрачной полимерной пластинки с 20 микропробирками, содержащими дегидратированные субстраты для определения 20 тестов: β-D-галактозидазы, лизиндекарбоксилазы, орнитидекарбоксилазы, уреазы; образования индола, ацетоина; ферментации цитрата, эскулина, маннитола, арабинозы, ксилозы, адонитола, рамнозы, целлобиозы, мелецитозы, сахарозы, трегалозы, рафинозы, глюкозы. Исследования проводят так же, как тест-системой API 20E. Результаты учитывают через 4 ч инкубации при 36 °С. Вид бактерий идентифицируют по кодам.

Общим, недостатком всех рассмотренных тест-систем (API 20E, Rapid 20E, Enterotest I и Enterotest 2, Enterotest 16, Entero-Screen, MMTE 1 и ММТЕ 2), является необоснованный перерасход тест-систем, ввиду отсутствия предварительного отбора культур по тесту ферментации глюкозы или позднего учета О/Ф теста с глюкозой (уже после использования тест-систем).

Комплект состоит из флаконов с полимерными капельницами, содержащих по 22 мл жидких дифференциальных сред; флаконов с капельницами, содержащих по 22 мл реактивов, и стерильных полистироловых 96-луночных планшетов длямикротитрования однократного применения с крышками. Тест-система обеспечивает постановку 13 тестов: выявление уреазы, триптофандезаминазы, индола, эскулина, лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы, нитратредуктазы; ферментации лактозы, сахарозы, маннитола, маннозы, арабинозы, адонитола. Исследованию подлежат чистые культуры, выросшие из отсевов колоний со сред выделения на секторах питательного агара (или питательного агара с желчью). Предварительно определяют их возможную принадлежность к семейству энтеробактерий экспресс- тестом на цитохромоксидазу, тестом «тяжа» на грамотрицательные бактерии, ферментацию глюкозы на среде Клиглера. На среде Клиглера учитывают также газообразование при ферментации углеводов и образование сероводорода. Дальнейшему исследованию подлежат грамотрицательные, оксидазонегативные, ферментирующие глюкозу бактерии. Дифференциальные среды во флаконах готовы к немедленному использованию. Для их применения срезают ножницами с соблюдением стерильности верхний закрытый край полимерной капельницы и закрывают отверстие съемным колпачком капельницы. При исследованиях среда из флакона выдавливается по каплям путем надавливания пальцами на эластичные стенки капельницы. Дифференциальные среды вносят в планшеты по 4 капли (100 мкл) в лунку. Среды для одной культуры размещают в одном горизонтальном ряду из 12 лунок в постоянной последовательности (в одной лунке с маннитом содержится и субстрат на нитратредуктазу).

Специфичность (достоверность) идентификации энтеробактерий тест-системой составляет 97,6 ± 0,6 %. Диагностическая чувствительность: идентификация 96 ± 0,5 % изолятов энтеробактерий. Это единственная отечественная тест-система ускоренной идентификации энтеробактерий. Она наиболее экономична, обеспечивает большой объем исследований, проста и надежна в использовании. Стоимость одного исследования существенно дешевле, чем всеми другими тест-системами.

Выпускается также вариант тест-системы «РАПИД-ЭНТЕРО-50» на 50 исследований.

Для идентификации редких видов энтеробактерий, не предусмотренных тест-системами, применяют дополнительные тесты в соответствии с видовой характеристикой энтеробактерий, указанной в определителе бактерий Берджи (см. Приложение).

Источник

Применение транспортных систем в работе микробиологической лаборатории

Любое лабораторное исследование состоит из нескольких этапов: преаналитического, аналитического, постаналитического. Если аналитический этап полностью проходит в лаборатории, то два других этапа имеют довольно основательную внелабораторную составляющую. Эта их особенность значительно затрудняет проведение согласованных, последовательных мероприятий по обеспечению качества.
Одну из самых рутинных процедур в диагнозе бактериальных инфекций составляет процесс сбора и безопасной для сохранности транспортировки клинических проб от пациента в лабораторию. Эта операция может быть выполнена при помощи транспортных пробирок.

Актуальность бактериологических исследований связана с широким распространением иммунодефицитных состояний среди населения и неукоснительным ростом на этом фоне инфекций, вызванных условно-патогенными микроорганизмами. Постановка диагноза этих инфекций основана на результатах микробиологических исследований больных. Эти же исследования лежат в основе рациональной терапии этих состояний.
Микробиологические методы имеют большое значение для выявления инфекционных заболеваний [1]. Лабораторная диагностика инфекционных болезней человека основана на обнаружении в организме пациента микроорганизма, вызвавшего заболевание, микробных антигенов или продуктов их жизнедеятельности (токсинов и др.).
Материалом для исследования служат: кровь, гной, моча, мокрота, ликвор, испражнения, рвотные массы, промывные воды и ткани (биопсия, аутопсия). В некоторых случаях проводят исследование объектов окружающей среды: воздух, вода, пищевые продукты, смывы с различных поверхностей.
Любой клинический материал должен рассматриваться как потенциально опасный для человека. В обязанности медицинской сестры входит взятие биологического материала у больного, поэтому медицинский персонал должен соблюдать инфекционную безопасность при работе с заразным биоматериалом: при его взятии, хранении, транспортировке, соблюдать правила транспортировки исследуемого материала, грамотно оформлять сопровождающие документы – бланк-направление на исследование. Медицинская сестра должна иметь представление о правилах работы бактериологической лаборатории и основных методах микробиологической лабораторной диагностики [2, 3].
Успехи выделения чистой культуры микроорганизма определяется условиями взятия образца, транспортировки его в лабораторию и последующего хранения до проведения анализа. Если микроорганизм погибает на этапе транспортировки и хранения, достоверность исследования сильно падает [2].
Транспортировку биоматериала в лабораторию следует проводить в максимально короткие сроки, соблюдая температурный режим, чтобы исключить гибель неустойчивых видов микроорганизмов или помещать его в специальные транспортные среды. В процессе транспортировки материал следует оберегать от действия света, тепла, холода, механических повреждений, чтобы исключить гибель микроорганизмов и контаминацию материала посторонней микрофлорой. Лучше материал доставлять в изотермических контейнерах, которые легко очищать и обеззараживать.
До настоящего времени во многих бактериологических лабораториях для транспортировки биоматериала использовали самостоятельно приготовленные питательные среды в пробирках с тампоном. В таких условиях биоматериал необходимо доставлять в лабораторию в течение 2-х часов. Неудобством таких сред является то, что они имеют короткий срок годности, должны храниться только в холодильнике, а при транспортировке с биоматериалом в лабораторию пробка может открыться, а среда разлиться.
В последние годы в связи с разработкой новых лабораторных технологий, значительно расширились возможности безопасной транспортировки биоматериала для микробиологических исследований, которые гарантируют не только полную безопасность образца и персонала, но и позволяют сохранить жизнеспособность бактерий в исследуемом материале от пациентов длительное время. В Национальном медицинском холдинге г. Астана на базе АО «Республиканский диагностический центр» с 2012 года идет централизация микробиологических лабораторий. Для транспортировки биоматериала из дочерних клиник холдинга применяются транспортные среды (тупферы), которые представляют собой пластиковый шток с хлопковым тампоном и помещены в пробирку с транспортной средой (рисунок 1).

Пробирки с транспортной средой до использования хранятся при комнатной температуре. Так как транспортная среда представляет собой гелеобразное вещество – пробирку с биоматериалом можно транспортировать как в вертикальном, так и в горизонтальном положении. Бактериальные культуры гарантированно сохраняют жизнеспособность до 48 часов при t0 15-220С.

Микроорганизмы в материале пробы защищены от высыхания влагой, содержащейся в транспортировочной среде. Эта среда предназначена для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов во время транспортировки в лабораторию.
После отбора проб тампон помещается в пробирку с транспортировочной средой и доставляется в лабораторию, где проводится культивация микроорганизмов на соответствующих питательных средах.
Транспортная системы предназначены для сбора и транспортировки только бактериологических проб. Для анаэробных обследований предпочтительнее использовать являются следующие: пробы тканей, полученные во время хирургических процедур, биопсия тканей или кости, жидкость, гной или отсосанные газы, собранные с использованием шприца. Для проб, содержащих вирусы или хламидии, не могут быть использованы данные транспортные системы.

Каждая пробирка снабжена этикеткой, на которой предусмотрено место для внесения сведений о фамилии пациента, дате и времени отбора пробы, номере истории болезни, подписи врача, отобравшего материал, наименовании образца и названии медучреждения.
Применение этих изделий, как стандартных закрытых систем, не требует использования дополнительных нестандартных, смонтированных вручную средств предохранения взятого материала от посторонней контаминации, высыхания и т. д. Главным образом, они используются для взятия, сохранения и транспортировки материала в ограниченные сроки (до 5 часов) на небольшие расстояния. Например, транспортировка проб внутри медучреждения, при отборе и транспортировке проб, взятых на вызове у больного, или при экстренной доставке проб из медучреждения в ближайшую контрольную лабораторию.
Таким образом, опыт работы с такими транспортными средами свидетельствуют о возможности использования их в клинической микробиологии.

Источник