Транспортная среда с углем для чего

Транспортная среда Амиеса с углем

Транспортная среда Амиеса рекомендуется для пересылки и консервации различных биоматериалов, подлежащих микробиологическому исследованию.

Amies Transport Medium with Charcoal (M651), слева направо:
1. Вагинальный мазок
2. Мазок из глотки
3. Контроль

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 20,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Разлить в необходимом количестве во флаконы с завинчивающимися крышками или в пробирки, например, по 6 мл. Стерилизовать автоклавированием при 1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить в вертикальном положении. Во время застывания несколько раз повернуть пробирки (для равномерного распределения частиц угля в среде).

Принцип и оценка результата:

Amies (1) модифицировал транспортную среду Stuart (2, 3, 4) путем замены глицерофосфата на неорганический фосфатный буфер и добавления в среду активированного угля. В данном виде среда имеет низкий редокс-потенциал (за счет присутствия тиогликолята натрия и небольшого количества агар-агара). Уголь помогает нейтрализовать вещества, токсичные для некоторых возбудителей, например, гонококков. Соли кальция, магния, калия и натрия способствуют выживанию гонококков и поддерживают жизнеспособность других бактериальных клеток.

Для отбора материала рекомендуется использовать ватные тампоны или деревянные палочки, которые опускают на одну треть глубины среды. Во время завинчивания крышки тампон продвигается ко дну пробирки со средой. Крышка должна быть плотно завинчена. Среду с материалом рекомендуется держать на холоде, но не замораживать.

Для выделения и идентификации микроорганизмов образец по возможности быстро и асептично извлекают из пробирки и делают посевы на соответствующих средах.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий черный порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется полужидкая среда, соответствующая по плотности 0,4%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

В пробирках формируется черный опалесцирующий столбик геля.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (2% вес/об) имеет рН 7,2 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35°С после подращивания на триптон-соевом агаре (М290).

Источник

Как была создана транспортная среда Эймса (AMIES)

Транспортные среды широко используются в лабораторной практике. Они дают возможность получить надежные результаты даже в условиях длительного хранения и транспортировки биопроб. Для понимания принципов работы широкоизвестной транспортной среды Эймса (Amies) мы предлагаем Вам ознакомиться с ее физико-химическими характеристиками.

Правильный забор и транспортировка микроорганизмов критично важны для их восстановления и определения в культуре при последующем посеве. Если патогенные микробы погибают на преаналитическом этапе исследований, достоверность анализов падает, что сильно искажает их результаты. Для поддержания жизнеспособности чувствительных микроорганизмов (например, рода Neisseria) после их забора до лаборатории Стюартом была разработана одноименная транспортная питательная среда. После ее модификации Эймсом этот состав стал одним из самых широко используемых сегодня.

Классическая формула Стюарта

Модифицированный состав Эймса

Главное отличие среды Эймса от оригинальной среды Стюарта состоит в том, что глицерофосфат был заменен неорганическим фосфатным буфером. Из-за того, что колиформные организмы и некоторые другие грамотрицательные палочки метаболизируют глицерофосфат в среде Стюарта, их количество в бакпосевах из ран, горла, фекальных образцов увеличивалось, что искажало количественные результаты анализов.

Также Эймсом было показано, что для поддержки жизнеспособности штаммов Neisseria gonorrhoeae концентрация NaCl 0,3 г/л является оптимальной. Ионы Са2+ и Mg2+ были добавлены в состав среды, так как считается, что они регулируют проницаемость клеточной стенки бактерий и таким образом влияют на их выживаемость.

Стюарт обнаружил, что выживаемость Neisseria gonorrhoeae резко увеличивалась при взятии мазков палочками с углем. Проблема была в том, что из-за черной угольной пыли они не пользовались популярностью среди пациентов. Эймс предложил оригинальное решение: добавить активированный уголь непосредственно в транспортную среду.

Выживаемость N. gonorrhoeae при 22°C [1] вне среды:

85 штаммов

С углем

Без угля

Время

К-во выживших штаммов

К-во выживших штаммов

и в транспортных средах:

100 штаммов

Среда Стюарта

Среда Amies

Time

К-во выживших штаммов

К-во выживших штаммов

Активированный уголь благодаря большой удельной поверхности обладает высокой адсорбционной способностью. Таким образом, роль угля в высокой выживаемости бактерий в среде Эймса состоит в адсорбции молекул веществ, токсичных для микроорганизмов.

Концентрация агара в среде Эймса была немного увеличена по сравнению с классической формулой среды Стюарта, поскольку присутствие частиц угля негативно влияло на гелеобразующие свойства агара. Также из-за наличия угля Эймс убрал из оригинального состава транспортной среды метиленовый синий, который раньше использовался в качестве редокс-индикатора.

В итоге, во многих исследованиях было показано высокую эффективность использования транспортной среды Стюарта с модификациями Эймса для поддержания даже таких прихотливых микроорганизмов как Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes and Corynebacterium diphtheriae [2, 3].

Сегодня на украинском рынке выбор транспортных сред достаточно широкий. Мы предлагаем Вам серию заметок, которые помогут Вам лучше разобраться в особенностях их состава и применения. Если же у Вас возникают вопросы, касающиеся использования транспортных сред, квалифицированные специалисты компании Sente-Lab будут рады Вам помочь.

1. Amies C. R. A modified formula for the preparation of Stuart’s transport medium //Canadian Journal of Public Health/Revue Canadienne de Sante’e Publique. – 1967. – P. 296-300.

2.Barry A. L., Fay G. D., Sauer R. L. Efficiency of a transport medium for the recovery of aerobic and anaerobic bacteria from applicator swabs //Applied microbiology. – 1972. – Vol. 24. – №. 1. – P. 31-33.

3.Bartlett J. G. et al. Anaerobes survive in clinical specimens despite delayed processing //Journal of clinical microbiology. – 1976. – Vol.. 3. – №. 2. – P. 133-136.

Источник

Вопросы по использованию транспортной среды Amies

С появлением большого ассортимента транспортных сред на украинском рынке стало легко запутаться в их особенностях и условиях использования. Для того, чтобы облегчить работу лаборантов и обеспечить точность и воспроизводимость результатов анализов, в этой заметке мы решили дать ответы на часто возникающие вопросы по работе с транспортной средой Эймса (Amies).

Amies: с углем или без?

Выживаемость бактерий зависит от таких параметров, как их вид и концентрация в образце, время и температура при транспортировке, а также состав транспортной среды. Польза добавления активированного угля была показана Эймсом ещё в 50-х годах: ­ благодаря большой удельной поверхности он обладает высокой адсорбционной способностью. Поглощение молекул токсичных веществ обеспечивает высокую выживаемость микроорганизмов. Так, для некоторых особо чувствительных бактерий, а именно Neisseria gonorrhoeae и Bordetella pertussis, в научной литературе показано необходимость добавления угля в среду. В то же время для повседневной работы вполне достаточно системы с транспортной средой Эймса, не содержащей уголь, даже для таких бактерий как Neisseria meningitidis, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes. Главное преимущество использования такой модификации транспортной среды Эймса состоит в том, что она совместима с окрашиванием по Граму.

Как подобрать тип аппликатора?

Нужный тип аппликатора определяют в зависимости от участка тела, с которого берут образец. Наиболее универсальный материал для стержня аппликатора – это пластик (полипропилен). Более специфические, но очень распространённые в настоящее время аппликаторы сделаны из алюминия. Благодаря тому, что они более тонкие и гибкие, их используют для забора образцов из самых труднодоступных участков человеческого тела: ­уха, носа, глаз и уретры.

Можно ли использовать транспортную среду Эймса для анаэробных микроорганизмов?

Поскольку головка аппликатора полностью погружается в агарозный столбик, контакт пробы с воздухом минимальный. Также в качестве восстановителя в составе транспортной среды добавлен тиогликоллят натрия, что позволяет использовать транспортную среду Эймса в том числе и для анаэробов.

Подходит ли транспортная среда Эймса для проведения ПЦР­ исследований?

Нет, для ПЦР необходимо использовать специальные тест-­системы, а транспортировку образцов нужно проводить в физиологическом растворе.

В каких условиях хранить транспортную среду Эймса?

Все транспортные среды Эймса необходимо хранить сухом месте при температуре от +5С до + 30С — замораживать их нельзя! Также пробирки с транспортными средами непригодны к использованию, если целостность упаковки была нарушена или у них истек срок годности.

Надеемся, что мы смогли собрать самые распространенные вопросы по использованию транспортной среды Эймса.

Если же Вы хотите получить дополнительную консультацию, будем рады Вам помочь!

Источник

Транспортная среда Эймса с древесным углем

Amies Transport Medium w/Charcoal

Фасовка 500 г. Срок годности 4 года.
Хранить при температуре 20°С

Среда для транспортировки и сохранения микробиологических проб; рекомендуется для мазков из горла, влагалища и ран, а также для выживания Neisseria gonorrhoeae

Формула в граммах на литр

Активированный уголь 10,0 Хлорид натрия 3,0

Na2HPO4 1,1 Тиогликолят натрия 1,0

Хлорид калия 0,2 KH2PO4 0,2

Хлорид кальция 0,1 Хлорид магния 0,1

Бактериологический агар № 2 7,5

Конечная величина pH 7,3 ± 0,2 при 25°C

Развести 23,2 г среды в 1 литре дистиллированной воды. Тщательно перемешать и нагреть. Часто помешивая, довести до кипения. Кипятить в течение минуты до полного растворения. Разлить в пробирки и стерилизовать 15 минут при 121°C. Поддерживать гомогенное распределение угля по всей среде, переворачивая пробирки по мере их осты­вания. Готовая среда должна быть черного цвета и храниться при 2–8°C.

Транспортная среда Эймса с древесным углем используется для сбора, транспортировки и сохранения микробиологических образцов. Ее состав рассчитан на поддержание жизнеспособности микроорганизмов без существенного увеличения роста. Среда не является питательной, содержит фосфатный буфер, полужидкая.

Эймс (Amies, 1967) разработал транспортную среду с углем после того, как доказал, что коэффициент выживания N. gonorrhoeae увеличивается при использовании угольных тампонов. Эймс решил проблему удаления угля из тампонов, включив уголь в состав среды. Транспортная среда Эймса рекомендуется для мазков из горла, влагалища и ран.

Древесный уголь, входящий в состав среды, нейтрализует жирные кислоты, токсичные для микроорга­низмов. Хлоридные соли поддерживают осмотический баланс, фосфаты выступают в качестве буферной сис­темы; тиогликолят натрия подавляет окислительные процессы и поддерживает восстановительные условия среды.

Поместить инокулированные стерильные тампоны в верхнюю треть транспортной среды в транспортиро­вочном контейнере; отломить выступающую часть стрежня тампона и плотно завинтить крышку. Отправить в лабораторию в течение 24 часов для анализа культуры. До отправки образцы можно хранить в холодильнике.

Следующие результаты были получены при использовании среды на тестовых культурах, хранившихся при различных температурах (4°C и комнатная температура) до 72 часов.

Источник

Для всех

Полезная информация для каждого

Контейнеры и транспортные среды

Контейнер для биоматериалов служит для забора и дальнейшей транспортировки для лабораторных исследований и анализов кала, а также других биологических материалов. Такие контейнеры изготавливаются из чистейшего полипропилена или же медицинского прозрачного полистирола. Эти материалы являются нейтральными и химически и бактериально. Конструкция контейнера имеет достаточно высокую механическую устойчивость и много других технических и эксплуатационных преимуществ. Контейнер для сбора биоматериалов оснащается, как правило, специальной лопаточкой для удобного сбора биологических веществ (кала).

Использование такой тары в специализированном корпусе, при транспортировке в медицинские учреждения практически исключает вероятность попадания в анализы (мочи, кала) посторонних веществ, что дает гарантию проведения качественного анализа и получения достоверных результатов. Процесс производства таких контейнеров проходит в стерильной атмосфере и материал обрабатывается при температурной нагрузке +250°С. Весь процесс полностью автоматизирован без применения ручных манипуляций, что гарантирует исключение вероятности попадания внутрь контейнеров различных посторонних примесей.

Любая конструкция контейнера для биоматериала оснащена герметично завинчивающейся крышкой, как правило, красного или желтого цвета, обеспечивающей защиту от утечки, расплескивания содержимого и ингаляционного контакта. Эта крышка оснащена небольшой специальной лопаткой (ложкой) для удобного сбора биоматериала. Для нанесения на контейнер информации о пробе на практически полностью прозрачной стенке имеется матовая панель или этикетка.

При выборе контейнера для биовеществ определяются физические характеристики, наличие правильных барьерных свойств (защиты от влаги). Сегодня на соответствующем направлению рынке существует около 90 типов пластиковых контейнеров и сотня модифицированных видов. Преимущества пластиковых контейнеров для сбора биологических материалов:

Контейнеры изготавливаются из нескольких типов материалов: полипропилен (ПП), полистирол (ПС).

Контейнеры из ПС обладают идеальной прозрачностью, контейнеры из ПП слегка мутные, но обладают высокой механической прочностью.

Контейнеры выдерживают низкую температуру, благодаря чему их можно транспортировать в термоконтейнерах при пониженной температуре.

Контейнеры снабжены герметично завинчивающейся крышкой из ПЭВД. Контейнеры выпускаются двух видов: стерильные и нестерильные. Контейнеры стерильные используются чаще всего как контейнеры для сбора материала на бактериологический анализ. Стерильные контейнеры для анализов могут быть помещены в индивидуальную упаковку и реализовываться через аптечную сеть или специальные аппараты в поликлинических и стационарных учреждениях. Контейнер на 125 мл – универсальный и подходит как для отбора мочи (контейнер для мочи) на клинический или бактериологический анализ, так и для отбора проб на пищевых и фармацевтических производствах и прочих типов проб. На стенке контейнера имеется матовая панель для удобства маркировки.

1. Транспортная среда – предназначена для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов от момента отбора пробы до начала исследования

2. Среда сохранения – предназначена для длительного хранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов

3. Среда восстановления – позволяет находящимся в состоянии стресса и ослабленным микроорганизмам восстанавливать способность для нормального роста (без обязательного условия их размножения)

ГОСТ Р ИСО 11133-1-2008

Указанные среды не предназначены для размножения микроорганизмов, а, следовательно, не должны содержать питательных веществ. Их наличие может отрицательно сказаться на качестве среды, поскольку будет способствовать размножению сопутствующей (не целевой) микрофлоры). Не все транспортные среды перечисленные ниже отвечают этим требованиям.

Транспортная среда Stuart

Транспортная среда Amies

Молочно-триптозно-глюкозо-глицериновая транспортная среда (STGG)

Тиогликолевая транспортная среда

Солевая транспортная среда для Vibrio spp.

Яичная среда Dorset

Коммерческие транспортные системы

В настоящее время все, наиболее широко распространенные транспортные среды выпускаются ведущими производителями микробиологической продукции. Данная продукция включает:

Сухие дегидратированные транспортные среды, предназначенные для приготовления в лаборатории.

Готовые к применению транспортные среды

Транспортные системы, представляющие собой пробирку (контейнер) и тампон или другое устройство для взятия материала

Транспортная среда: Культуральная среда, предназначенная для сохранения и поддержания жизнеспособности микроорганизмов с момента отбора образца до начала ее анализа в лаборатории.

Инструкция по применению транспортной среды Эймса.

Транспортная полужидкая среда Эймса предназначена для сохране­ния жизнеспособности широкого круга бактерий, в том числе требовательных, с момента забора материала для посева до начала микробиологического исследования. Среда предупреждает гибель микробных клеток, сохраняет их жизнеспособность, но, в то же время, препятству­ет размножению микроорганизмов, что исключает или существенно ог­раничивает преимущественный рост менее требовательных микроор­ганизмов при ассоциативной микрофлоре субстрата.

Среда Эймса выпускается в двух вариантах: с добавлением угля и без него. Активированный уголь сорбирует метаболиты, угнетающие жиз­неспособность высокочувствительных патогенных микроорганизмов (в частности, гонококков).

В герметично укупоренных флаконах (по 200 и 400 мл) и в виде транспортных систем (по 5 мл на пробирку).

ПОДГОТОВКА СРЕДЫ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ:

С соблюдением правил асептики снять с флакона со средой алюминиевый колпачок и заменить резиновую пробку на стерильную ватно-марлевую. На водяной бане разогреть флакон со средой до её полного расплавления (не кипятить!). Извлечь флакон из водяной бани и частично остудить при комнатной температуре в течение 10-15 минут. Стерильно над пламенем горелки разлить транспортную среду в пробирки по 6-10 мл. Объем среды в пробирках определяется техников посева: при посеве мазка, взятого тампоном на тампонодержателе, достаточен небольшой столбик среды (6 мл). При прямом посеве биоматериала (без тампона) объем среды в пробирке увеличивают.

ПОСЕВ И ТРАНСПОРТИРОВКА:

Биологический материал погружают в столбик среды таким образом, чтобы он не оставался на ее поверхности. После этого пробирка с засеянной средой направляется в микробиологическую лабораторию в закрытом контейнере. Если транспортировка непосредственно после взятия материала невозможна, пробирки со средой необходимо поместить в рефрижератор (+2 +8 °С) или в прохладное, защищенное от теплового воздействия место. Среда Эймса сохраняет жизнеспособность требовательных аэробных и факультативно анаэробных бактерий около суток, после чего отмечается постепенная гибель клеток. Поэтому пересев с транспортной среды на обогащенные дифференциально-диагностические и другие общепринятые среды целесообразно проводить в минимальные сроки.

УСЛОВИЯ И СРОК ХРАНЕНИЯ:

Хранить в прохладном, защищённом от действия солнечных лучей месте.

Источник