ospc р25 маркер свежей инфекции положительный что это значит

Ospc р25 маркер свежей инфекции положительный что это значит

На этой странице находиться только текст статьи. Полная статья с картинками и таблицами находится здесь
Для просмотра требуется программа Adobe Reader.

Проблемы серологической диагностики иксодового клещевого боррелиоза у детей

Е.А. Мурина, д.б.н., в.н.с., руководитель отдела вирусологии и молекулярно­биологических методов исследования ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России,
г. Санкт­Петербург
О.В. Голева, к.б.н., с.н.с. отдела вирусологии и молекулярно­биологических методов исследования ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России, г. Санкт­Петербург
З.А. Осипова, к.б.н., н.с. отдела вирусологии и молекулярно­биологических методов исследования ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России, г. Санкт­Петербург
А.Л. Мукомолова, к.м.н., н.с. отдела вирусологии и молекулярно­биологических методов исследования ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России, г. Санкт­Петербург

В статье представлены проблемы серологической диагностики иксодового клещевого боррелиоза. Показана роль лабораторных серологических исследований в постановке диагноза. Приводятся данные по основным методам обнаружения и идентификации вирусов, вызывающих клещевой боррелиоз. Рассматриваются интерпретации полученных серологических исследований.
Ключевые слова: клещевой боррелиоз, серологическая диагностика, дети, лабораторный диагноз, интерпретация результата.

The Problems of Serologicl Diagnostics of Tick­Borne Borreliosis in Children
Е.А. Murina, O.V. Goleva, Z.A. Osipova, A.L. Mukomolova
Federal State­Financed Institution Pediatric Research and Clinical Center for Infectious Diseases under the Federal Medical Biological Agency, Russia, Saint­Petersburg
The article presents the problems of serologic diagnostics of tick­borne borreliosis. There is described the role of serologic investigations in making a diagnosis. There are given the data on basic methods of detection and identification of viruses causing tick­borne borreliosis. The interpretation of received serologic investigations is analysed.
Keywords: tick­borne borreliosis, serologic diagnostics, children, laboratory diagnosis, result interpretation.

Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) или болезнь Лайма – это инфекционное заболевание, вызываемое спирохетами Воrreliа burgdorferi (боррелия Бургдорфери), которое переносят иксодовые клещи. Боррелиоз в отличие от клещевого энцефалита имеет бактериальное происхождение. Боррелии являются грам­отрицательными, подвижными, облигатными внутриклеточными паразитами. Вплоть до конца ХХ столетия клещам, как переносчикам заболевания, не уделялось большого внимания и только после изоляции в Америке возбудителя – B. Burgdorferi было установлено его значение в возникновении данного заболевания. Опасными для человека являются три вида: Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii и Borrelia garinii, но в России только два вида этих грамотрицательных спирохет — Borrelia afzelii и Borrelia garinii распространены на данный момент. ИКБ не передается от человека к человеку. Из всей популяции клещей в 20% это носители боррелий. Возбудитель, вызывающий болезнь Лайма, находится в пищеварительном тракте клеща, поэтому длительность его нахождения на теле человека после присасывания может определять опасность инфицирования и развитие впоследствии заболеваний различной степени тяжести. Ежегодно на территории Российской Федерации констатируется от 7 до 9 тысяч случаев болезни Лайма, которая встречается в основном у детей до 15 лет и у взрослых от 25 до 50 лет. Существуют также данные о выявлении болезни Лайма у младенцев, что объясняется передачей возбудителя трансплацентарно.
Главным отличительным признаком болезни Лайма является эритема, представляющая красное кольцо в месте укуса, которое может быть мигрирующим. У отдельных больных могут существовать и безэритемные формы течения болезни, но, протекающие с лихорадкой и интоксикацией [1, 2, 3].
Обнаружить возбудителя болезни Лайма у обследуемого пациента достаточно сложно. Они присутствуют в пораженных тканях или жидкостях и для их идентификации требуется культивирование на селективной питательной среде Barbour­Stoenner­Kelly (BSK), но эффективность таких исследований составляет всего 50%. Из­за методологических сложностей применение бактериальных методов идентификации возбудителя ограничено, а для этиологической диагностики практически исключено. Применение ПЦР­анализа, которое включает выделение ДНК боррелий в крови пациентов, в качестве этиологической диагностики является малоэффективным и неинформативным, в связи с возможным проникновением возбудителя в органы и ткани, минуя кровяное русло. Чувствительность исследований методом ПЦР на ранних сроках заболевания составляет не более 30%, а при хронизации процесса достигает лишь 10% [4]. Получение частых ложноотрицательных результатов при исследовании цереброспинальной или внутрисуставной жидкости, а также синовиальной ткани, крови и мочи пациентов, связано с тем, что в этих биологических материалах содержание боррелий не более 50 клеток/мл, что ниже порога чувствительности тест­систем. Особое внимание врач­лаборант должен обращать на результаты исследований цереброспинальной жидкости, полученной на поздних стадиях хронического боррелиоза, где количество боррелий минимизировано и составляет от 20 до 25 клеток/мл. [5, 6]. Поэтому ПЦР­диагностику боррелиоза с использованием биологических материалов пациентов скорее можно рекомендовать проводить при весомых клинических подозрениях на инфицирование, а также у пациентов с иммунодефицитными состояниями.
На сегодняшний момент наиболее информативным, простым, и диагностически значимым методом для подтверждения инфицирования боррелиями является иммуноферентный анализ, позволяющий обнаруживать в крови пациента специфические IgM и IgG антитела к возбудителю. Специфические антитела к Borrelia burgdorferi начинают определяться через 2–4 недели от момента начала заболевания. Сначала выявляются иммуноглобулины класса М, а затем, через 1,5–3 месяца после инфицирования, иммуноглобулины класса G. Сложности в диагностике возникают, как правило, при получении отрицательных результатов исследований, проводимых на ранних стадиях заболевания, что может быть связано с поздним антителообразованием или назначением антимикробной терапии сразу после присасывания клеща. Полученный отрицательный результат серологических тестов на ранних сроках после присасывания клеща не является окончательным подтверждением отсутствия инфицирования и требует повторного проведения исследования в динамике через 2–4 недели. При диссеминированных и хронических стадиях заболевания специфические антитела к возбудителю болезни Лайма выявляются практически всегда, то есть в каждом исследовании. Иммуноглобулины класса IgG от нескольких месяцев до нескольких лет циркулируют в крови и обнаруживаются даже после выздоровления, поэтому судить о проведенном лечении только по качественной характеристике наличия антител неправомерно. Иммунитет против Borrelia burgdorferi не является пожизненным и у части людей, перенесших ИКБ, через некоторое время возможно повторное заражение.
При расшифровке полученных лабораторных результатов иммуно­ферментного анализа следует обращать внимание на используемую тест­систему, поскольку анализы могут быть как качественными с интерпретацией «положительно» или «отрицательно», так и количественными, когда результат выражается в виде числовой характеристики концентрации антител. В случае расшифровки проведенного исследования на наличие антител класса IgG к боррелиям следует считать правомочным результат «отрицательно», если концентрация антител составляет менее 10 Ед/мл, от 10 до 15 Ед/мл результат рассматривается как «сомнительно», а свыше 15 Ед/мл — «положительно». При расшифровке результатов исследования антител класса IgM лабораторное заключение «отрицательно» может быть установлено при показателе концентрации антител менее 18 Ед/мл, «сомнительно» – 18–22 Ед/мл, а более 22 Ед/мл – «положительно». Однако, положительный результат при наличии антител класса IgG может указывать не только на болезнь, перенесенную в прошлом, но и наличие заболеваний, вызванных близкородственными спирохетами, например сифилисом или лептоспирозом, а также заболеваниями, обусловленными герпесвирусами (вирусом Эпштейна­Барра, цитомегаловирусом), наличием аутоиммунных, ревматоидных и гематологических заболеваний и других, поэтому для окончательной верификации возбудителя анализ нужно повторить через 1–2 недели. В тоже время полученные отрицательные или сомнительные результаты могут возникать при задержке иммунного ответа, вызванного особенностями, антигенной гетерогенностью возбудителя, наличием у больного иммуносупрессии (ВИЧ­1 инфекция) или при выборе малочувствительной тест­системы для диагностики.
При получении сомнительных результатов после проведения ИФА, в качестве референсного теста используется современный серологический метод –иммуноблотинг в модификациях лайнблот или вестернблот, с помощью которого можно выявлять антитела к высокоспецифичным белкам возбудителя, разделенным по молекулярному весу с помощью электрофореза. Данный способ помогает безошибочно со 100% чувствительностью и 100% специфичностью подтвердить наличие заболевания.
Иммуноблотинг дает возможность определять спектр специфических антител IgM и IgG классов, которые синтезируются у больного к различным антигенам боррелий. При проведении анализа результаты исследования учитываются по степени интенсивности окрашивания полосок­откликов антител на тестовой мембране с нанесенными антигенами, указывающих на наличие или отсутствие антител к тем или иным белкам возбудителя. Учет полосок ведется по каждому антигену с постановкой позитивного и негативного контролей. При обнаружении интенсивно окрашенных откликов антител на мембране результат считается «положительным»; при отсутствии – «отрицательным» и «сомнительным» или «неопределенным» при наличии слабых или неоднозначных откликов, которые не дают возможности достоверно констатировать отсутствие или наличие антител.
Согласно рекомендациям Второй национальной конференции по серологической диагностике болезни Лайма и Center for Diseases Control (CDC) (США) [7], положительным результат определения IgM антител в иммуноблоте следует считать положительным при выявлении двух из трех полос антигенов с молекулярным весом: 25 kDa (OspC), 39 kDa (BmpA) и флагеллин – 41 kDa (Fla). Среди них, пожалуй,
основной – это OspC p25, который при положительной реакции позволяет интерпретировать результат, как «острая» инфекция. Для регистрации положительного результата выявления IgG антител в иммуноблоте требуется определять не менее пяти положительных полос из десяти с антигенамами со следующим молекулярным весом: 18 kDa, 25 kDa (OspC), 28 kDa, 30 kDa, 39 kDa (BmpA), 41 kDa (Fla), 45 kDa, 58 kDa (не GroEL), 66 kDa и 93 kDa. Однако, данные рекомендации не совсем подходят для России, поскольку это обусловлено антигенной гетерогенностью штаммов и видов B. burgdorferi sensu lato. В настоящий момент считается, что некоторые из антигенов боррелий важны для детекции специфических IgG антител: Osp17, р21, p39, p41, p66, p83/100 (p93) из штаммов B. afzelii; p14, p41, p93 из штаммов B. Garinii; OspA, OspC, p93 из штаммов B. burgdorferi sensu stricto. Наиболее часто специфические IgM антитела в иммуноблоте обнаруживают к антигенам p18, OspC, p39, p41 из штаммов B. afzelii; p39, p41, p66, p83 из штаммов B. Garinii; OspC, OspA из штаммов B. burgdorferi sensu stricto. Одной из сложностей интерпретации результатов иммуноблота является то, что спектр антител к различным антигенам может варьировать в зависимости от стадии инфекции [8, 9]. Для подтверждения положительного результата анализ с использованием иммуноблота следует повторить через 3–6 недель. На настоящее время иммуноблот достаточно широко используется для выявления специфических антител в ликворе [10].

Диагностика иксодового клещевого боррелиоза осуществляется на основе комплексной оценки клинических данных и результатов лабораторных исследований. Выбор адекватных диагностических методов зависит от информативности, чувствительности и специфичности применяемых тестов. Своевременная и точная лабораторная диагностика клещевого боррелиоза базируется на использовании комплекса взаимодополняющих методов, основанных на различных подходах к выявлению в биологических средах маркеров возбудителя боррелиоза с учетом особенностей развития и тяжести течения заболевания, а также региональных особенностей B. burgdorferi. Оптимальная схема диагностики поможет определиться с тактикой адекватной терапии для обеспечения, в дальнейшем, благоприятного исхода заболевания.
Список литературы находится в редакции

Источник

Серологическая диагностика боррелиоза (иммуночип) в крови

Лайм-боррелиоз (ЛБ), болезнь Лайма или иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) – трансмиссивное полисистемное заболевание, приводящее к поражению опорно-двигательного аппарата, нервной и сердечно-сосудистой систем, кожи, занимающее по широте распространения и уровню заболеваемости одно из ведущих мест среди природно-очаговых заболеваний. Заболевание регистрируется на значительной территории Российской Федерации.

Возбудители ЛБ – боррелии комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato, переносчики – иксодовые клещи. В диагностике ЛБ необходимо учитывать эпидемиологический анамнез (посещение леса, присасывание клеща) и клинические проявления, главным из которых, является мигрирующая эритема на ранних стадиях заболевания. Однако до 50% случаев ЛБ могут протекать со стертыми клиническими признаками, в частности, в безэритемной форме, что осложняет постановку диагноза. Использование в клинической практике современных высокочувствительных и специфичных методов серологической диагностики ЛБ позволяет своевременно выявить ранний боррелиоз и начать курс лечения, сократить риск развития тяжелых хронических форм болезни Лайма, а также провести дифференциальную диагностику боррелиоза от других инфекций, передающихся иксодовыми клещами.

Серологическая диагностика клещевого боррелиоза (300049, 300051) – это уникальные исследования, выполняемые с помощью диагностической тест-системы в формате иммуночипа, разработанной в ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора!

Иммуночип повышает эффективность проведения серологического анализа ЛБ и информативность результата, т.к. позволяет одновременно определять в исследуемом образце антитела к 8 группам диагностически значимых антигенов боррелий видов Borrelia afzelii и Borrelia garinii, наиболее распространенных в РФ, и одновременно дифференцировать их по классам: IgM и IgG. Показано, что использование комбинации из нескольких рекомбинантных белков разных видов боррелий позволяет повысить чувствительность и специфичность теста. Иммуночип – высокочувствителен и специфичен (сравнительная оценка проводилась с коммерческими тест-системами в формате ИФА и иммунного блоттинга, зарегистрированными на территории РФ), исключает субъективность оценки благодаря автоматизированной интерпретации результатов.

На I (острой, первые три месяца) стадии заболевания антитела IgM и IgG обнаруживаются у 50-70% пациентов; уровень антител IgM достигает пика в первые 3-6 недель заболевания, пик синтеза антител IgG приходится на 6–8-ю неделю после начала инфекции. На ранней стадии острой формы заболевания с целью установления сероконверсии важно исследовать парные сыворотки, полученные от пациентов с интервалом в 20–30 дней. На II (подострой, длящейся 3-6 месяцев) стадии заболевания в зависимости от сроков развития диссеминации и органной патологии антитела IgM обнаруживаются у 30-80% пациентов, антитела IgG – у 65-100%. ВАЖНО: наличие антител IgМ к антигенам боррелий в сыворотке крови больных Лайм-боррелиозом, как правило, указывает на раннюю стадию инфекции. В некоторых случаях антитела IgM могут выявляться в течение 1–2 лет и более. На III (хронической, длящейся более 6 месяцев) стадии заболевания антитела IgM выявляются у 5-50 % больных, антитела IgG – практически в 100% случаев. ВАЖНО: специфические иммуноглобулины класса G могут детектироваться в течение длительного периода времени (несколько лет). Долго они сохраняются также и после успешно проведенной антибиотикотерапии.

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа. Исключить курение за 30 минут до сдачи анализа.

Стадия заболевания IgM антитела IgG антитела
Острая (I) OspC, p41, p17, VlsE P41, BBK32, p17, OspC, VlsE
Подострая (II) OspC, p41, p17, BBK32, VlsE p17, p41, VlsE, OspC, BBK32, p58
Хроническая (III) OspC, p41, VlsE, P39, p58 p17, BBK32, p41, p58, VlsE, p100, OspC, p39
Внимание!

При наличии признаков поражения центральной нервной системы рекомендуется проводить анализ специфических антител в спинномозговой жидкости (интратекальный синтез антител), так как отрицательный результат анализа сыворотки крови у больного нейроборрелиозом не свидетельствует об отсутствии у него инфекции. Исследование спинномозговой жидкости (СМЖ) обязательно проводится одновременно с исследованием сыворотки крови.
Отрицательный результат серологических тестов на ранних стадиях заболевания не является доказательством отсутствия инфекции.

Источник

Боррелии, антитела класса IgM методом Вестерн-блота (anti-Borrelia IgM, Western blot)

Развернутое исследование антител класса IgM к антигенам боррелий методом Вестерн-блота.

Диагностика ранних стадий Лайм борреллиоза основана преимущественно на характерных клинических признаках (мигрирующая эритема). Но у 20-45% больных возможна безэритемная форма заболевания. Диагностика в таких ситуациях по клиническим признакам практически невозможна. Серологические методы исследования часто помогают поставить правильный диагноз, хотя информативность серологического тестирования боррелиоза, к сожалению, ограничена. Определение антител класса IgM методом ИФА при серологической диагностике боррелиозной инфекции часто дает неясные результаты. У части пациентов отмечают длительное персистирование IgM антител, которые таким образом не всегда отражают свежую инфекцию. На поздней стадии боррелиоза положительный результат исследования IgM не дает никакой дополнительной информации. Распространенность антител к боррелиям в нормальной популяции зависит от региона и у людей, работающих в лесной зоне, может составлять до 40%. Антитела класса IgM иногда могут быть обнаружены спустя годы после возникновения инфекции или после лечения антибиотиками. Причина ложноположительных результатов часто остается невыясненной. В то же время, отрицательный результат по IgM не исключает наличия свежей инфекции, у части пациентов с текущей инфекцией отмечают серонегативность (отрицательный результат при исследовании специфических IgM и/или IgG). Нередки случаи расхождения результатов тестирования антител к Borrelia burgdorferi тест-системами разных производителей, что зависит от специфичности используемых антигенов и чувствительности систем.

Таким образом, в диагностике боррелиоза часто возникает потребность в дополнительном серологическом исследовании, которое может дать более подробную информацию при неясной клинической картине или вызывающих сомнение результатах исследования IgM и IgG методом ИФА. Исследование IgM антител к боррелиям методом Вестерн-блота позволяет дать развернутый ответ по наличию антител к 10 различным антигенам боррелий, включая специфичный антиген OspC p25, являющийся маркером свежей инфекции.

Обнаружение IgM антител против различных специфичных антигенов боррелий, при отсутствии антител к OspC, не считается достаточным указанием на недавно возникшую инфекцию. Для установления диагноза свежей боррелиозной инфекции полученный положительный результат по IgM-антителам следует подтвердить через 3-6 недель положительным результатом по антителам класса IgG на свежевзятом образце крови.

Источник антигенов в данном тесте – белки из экстракта специально подобранного штамма Borrelia afzelii и рекомбинантный антиген VisE.

Источник

Ospc р25 маркер свежей инфекции положительный что это значит

Исследование предназначено для качественного определения антител к антигенам боррелий в сыворотке крови человека для диагностики клещевого боррелиоза (болезни Лайма) и ассоциированных заболеваний: хронической мигрирующей эритемы, доброкачественного кожного лимфаденоза, атрофического хронического акродерматита, артрита, кардита, лимфоцитарного менингорадикулоневрита, нейроборрелиоза. Первыми в крови появляются иммуноглобулины M (IgM). Они выявляются через 2-3 недели после укуса клеща, достигая максимума через 6 недель, затем их уровень постепенно снижается в течение нескольких месяцев и даже лет. Исследование антител IgM оптимально проводить для диагностики недавнего заражения (в течение 1-2 месяцев после первых симптомов).

Антитела класса IgM к Borrelia burgdorferi (вестерн-блот), иммуноглобулины класса M к возбудителю боррелиоза (болезни Лайма, клещевого боррелиоза, лайм-боррелиоза).

Синонимы английские

Lyme Disease Antibody (IgM), Western Blot.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Общая информация об исследовании

Тест выявляет антитела к Borrelia burgdorferi. Эта бактерия относится к группе спирохет и вызывает у человека клещевой боррелиоз (болезнь Лайма).

Человек заражается, если его укусил клещ, который сам был инфицирован B. burgdorferi. Иксодовые клещи, переносчики боррелиоза, – это самая распространенная группа клещей, в умеренном поясе Северного полушария они встречаются повсеместно. Чаще всего заражение людей происходит в период активности клещей – весной и летом.

Инкубационный период боррелиоза составляет несколько недель. На ранних стадиях могут наблюдаться следующие симптомы: усталость, озноб, головные боли. Также при боррелиозе иногда возникает характерная сыпь – мигрирующая эритема (кольцевидное покраснение кожи, которое постепенно расширяется). Если болезнь не лечить, то могут возникнуть серьезные проблемы: боль в суставах, менингит, онемение конечностей, паралич лицевого нерва, расстройства памяти и (в редких случаях) поражения глаз и сердца. Лечение болезни, как правило, эффективно.

При инфицировании лимфоциты человека начинают вырабатывать антитела – специальные белки (иммуноглобулины), которые должны нейтрализовать бактерии. Иммуноглобулины M (IgM) появляются в крови первыми, через несколько дней после заражения. Однако выявить их удается обычно на более поздних сроках (через 2-3 недели). Примерно через 6 недель концентрация IgM достигает максимума и затем постепенно уменьшается (в течение нескольких месяцев и даже лет).

Антитела другого типа – иммуноглобулины G (IgG) – появляются обычно немного позже и сохраняются в крови дольше. Однако и IgG, и IgM могут присутствовать у человека, который уже выздоровел.

Таким образом, антитела IgM лучше всего подходят для диагностики недавнего заражения (тест на них имеет смысл в течение 1-2 месяцев после первых симптомов).

Анализ на антитела рекомендуется проводить в два этапа. Первый шаг – это определение титра антител IgM и IgG (обычно с помощью ИФА). Второй шаг – белковый иммуноблот (вестерн-блотинг).

Если с помощью ИФА получен отрицательный результат, то его не проверяют, считая достоверным. Если же результат ИФА был положительный или неточный, то тест проводят еще и с помощью иммуноблота. Иммуноблот более специфичен, чем ИФА, и позволяет отсечь некоторые ложноположительные результаты. Исследование обладает высокой специфичностью (98 %) и чувствительностью (95 %), является более точным по сравнению с ИФА, при тестировании используется рекомбинантный высокоиммуногенный белок VlsE, выделенный из Borrelia burgdorferi, обладающий наибольшей чувствительностью по сравнению с другими антигенами для выявления IgG.

При проведении иммуноблота выявляются антитела к нескольким разным белкам B. burgdorferi. Результат этого теста – качественный, то есть он должен быть однозначным: либо антитела есть, либо их нет. Однако распространена ситуация, когда некоторые белки связались с антителами, а некоторые нет. В таком случае интерпретация результатов исследования зависит от того, какую именно тест-систему используют в диагностической лаборатории. Дело в том, что набор белков для иммуноблота может быть разным. Поэтому каждая фирма-производитель предлагает свои критерии оценки (например, результат считается положительным, если 2 из 3 важнейших белков связались с антителами). Поэтому интерпретацию результатов теста проводят сотрудники диагностической лаборатории, которые знают, какую именно методику использовать, и они же делают окончательный вывод, заражен ли пациент боррелиозом.

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

* Перед анализом после укуса клеща должно пройти более 2 недель.

Источник