ospa p31 положительно что это

Ospa p31 положительно что это

На этой странице находиться только текст статьи. Полная статья с картинками и таблицами находится здесь
Для просмотра требуется программа Adobe Reader.

Проблемы серологической диагностики иксодового клещевого боррелиоза у детей

Е.А. Мурина, д.б.н., в.н.с., руководитель отдела вирусологии и молекулярно­биологических методов исследования ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России,
г. Санкт­Петербург
О.В. Голева, к.б.н., с.н.с. отдела вирусологии и молекулярно­биологических методов исследования ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России, г. Санкт­Петербург
З.А. Осипова, к.б.н., н.с. отдела вирусологии и молекулярно­биологических методов исследования ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России, г. Санкт­Петербург
А.Л. Мукомолова, к.м.н., н.с. отдела вирусологии и молекулярно­биологических методов исследования ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России, г. Санкт­Петербург

В статье представлены проблемы серологической диагностики иксодового клещевого боррелиоза. Показана роль лабораторных серологических исследований в постановке диагноза. Приводятся данные по основным методам обнаружения и идентификации вирусов, вызывающих клещевой боррелиоз. Рассматриваются интерпретации полученных серологических исследований.
Ключевые слова: клещевой боррелиоз, серологическая диагностика, дети, лабораторный диагноз, интерпретация результата.

The Problems of Serologicl Diagnostics of Tick­Borne Borreliosis in Children
Е.А. Murina, O.V. Goleva, Z.A. Osipova, A.L. Mukomolova
Federal State­Financed Institution Pediatric Research and Clinical Center for Infectious Diseases under the Federal Medical Biological Agency, Russia, Saint­Petersburg
The article presents the problems of serologic diagnostics of tick­borne borreliosis. There is described the role of serologic investigations in making a diagnosis. There are given the data on basic methods of detection and identification of viruses causing tick­borne borreliosis. The interpretation of received serologic investigations is analysed.
Keywords: tick­borne borreliosis, serologic diagnostics, children, laboratory diagnosis, result interpretation.

Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) или болезнь Лайма – это инфекционное заболевание, вызываемое спирохетами Воrreliа burgdorferi (боррелия Бургдорфери), которое переносят иксодовые клещи. Боррелиоз в отличие от клещевого энцефалита имеет бактериальное происхождение. Боррелии являются грам­отрицательными, подвижными, облигатными внутриклеточными паразитами. Вплоть до конца ХХ столетия клещам, как переносчикам заболевания, не уделялось большого внимания и только после изоляции в Америке возбудителя – B. Burgdorferi было установлено его значение в возникновении данного заболевания. Опасными для человека являются три вида: Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii и Borrelia garinii, но в России только два вида этих грамотрицательных спирохет — Borrelia afzelii и Borrelia garinii распространены на данный момент. ИКБ не передается от человека к человеку. Из всей популяции клещей в 20% это носители боррелий. Возбудитель, вызывающий болезнь Лайма, находится в пищеварительном тракте клеща, поэтому длительность его нахождения на теле человека после присасывания может определять опасность инфицирования и развитие впоследствии заболеваний различной степени тяжести. Ежегодно на территории Российской Федерации констатируется от 7 до 9 тысяч случаев болезни Лайма, которая встречается в основном у детей до 15 лет и у взрослых от 25 до 50 лет. Существуют также данные о выявлении болезни Лайма у младенцев, что объясняется передачей возбудителя трансплацентарно.
Главным отличительным признаком болезни Лайма является эритема, представляющая красное кольцо в месте укуса, которое может быть мигрирующим. У отдельных больных могут существовать и безэритемные формы течения болезни, но, протекающие с лихорадкой и интоксикацией [1, 2, 3].
Обнаружить возбудителя болезни Лайма у обследуемого пациента достаточно сложно. Они присутствуют в пораженных тканях или жидкостях и для их идентификации требуется культивирование на селективной питательной среде Barbour­Stoenner­Kelly (BSK), но эффективность таких исследований составляет всего 50%. Из­за методологических сложностей применение бактериальных методов идентификации возбудителя ограничено, а для этиологической диагностики практически исключено. Применение ПЦР­анализа, которое включает выделение ДНК боррелий в крови пациентов, в качестве этиологической диагностики является малоэффективным и неинформативным, в связи с возможным проникновением возбудителя в органы и ткани, минуя кровяное русло. Чувствительность исследований методом ПЦР на ранних сроках заболевания составляет не более 30%, а при хронизации процесса достигает лишь 10% [4]. Получение частых ложноотрицательных результатов при исследовании цереброспинальной или внутрисуставной жидкости, а также синовиальной ткани, крови и мочи пациентов, связано с тем, что в этих биологических материалах содержание боррелий не более 50 клеток/мл, что ниже порога чувствительности тест­систем. Особое внимание врач­лаборант должен обращать на результаты исследований цереброспинальной жидкости, полученной на поздних стадиях хронического боррелиоза, где количество боррелий минимизировано и составляет от 20 до 25 клеток/мл. [5, 6]. Поэтому ПЦР­диагностику боррелиоза с использованием биологических материалов пациентов скорее можно рекомендовать проводить при весомых клинических подозрениях на инфицирование, а также у пациентов с иммунодефицитными состояниями.
На сегодняшний момент наиболее информативным, простым, и диагностически значимым методом для подтверждения инфицирования боррелиями является иммуноферентный анализ, позволяющий обнаруживать в крови пациента специфические IgM и IgG антитела к возбудителю. Специфические антитела к Borrelia burgdorferi начинают определяться через 2–4 недели от момента начала заболевания. Сначала выявляются иммуноглобулины класса М, а затем, через 1,5–3 месяца после инфицирования, иммуноглобулины класса G. Сложности в диагностике возникают, как правило, при получении отрицательных результатов исследований, проводимых на ранних стадиях заболевания, что может быть связано с поздним антителообразованием или назначением антимикробной терапии сразу после присасывания клеща. Полученный отрицательный результат серологических тестов на ранних сроках после присасывания клеща не является окончательным подтверждением отсутствия инфицирования и требует повторного проведения исследования в динамике через 2–4 недели. При диссеминированных и хронических стадиях заболевания специфические антитела к возбудителю болезни Лайма выявляются практически всегда, то есть в каждом исследовании. Иммуноглобулины класса IgG от нескольких месяцев до нескольких лет циркулируют в крови и обнаруживаются даже после выздоровления, поэтому судить о проведенном лечении только по качественной характеристике наличия антител неправомерно. Иммунитет против Borrelia burgdorferi не является пожизненным и у части людей, перенесших ИКБ, через некоторое время возможно повторное заражение.
При расшифровке полученных лабораторных результатов иммуно­ферментного анализа следует обращать внимание на используемую тест­систему, поскольку анализы могут быть как качественными с интерпретацией «положительно» или «отрицательно», так и количественными, когда результат выражается в виде числовой характеристики концентрации антител. В случае расшифровки проведенного исследования на наличие антител класса IgG к боррелиям следует считать правомочным результат «отрицательно», если концентрация антител составляет менее 10 Ед/мл, от 10 до 15 Ед/мл результат рассматривается как «сомнительно», а свыше 15 Ед/мл — «положительно». При расшифровке результатов исследования антител класса IgM лабораторное заключение «отрицательно» может быть установлено при показателе концентрации антител менее 18 Ед/мл, «сомнительно» – 18–22 Ед/мл, а более 22 Ед/мл – «положительно». Однако, положительный результат при наличии антител класса IgG может указывать не только на болезнь, перенесенную в прошлом, но и наличие заболеваний, вызванных близкородственными спирохетами, например сифилисом или лептоспирозом, а также заболеваниями, обусловленными герпесвирусами (вирусом Эпштейна­Барра, цитомегаловирусом), наличием аутоиммунных, ревматоидных и гематологических заболеваний и других, поэтому для окончательной верификации возбудителя анализ нужно повторить через 1–2 недели. В тоже время полученные отрицательные или сомнительные результаты могут возникать при задержке иммунного ответа, вызванного особенностями, антигенной гетерогенностью возбудителя, наличием у больного иммуносупрессии (ВИЧ­1 инфекция) или при выборе малочувствительной тест­системы для диагностики.
При получении сомнительных результатов после проведения ИФА, в качестве референсного теста используется современный серологический метод –иммуноблотинг в модификациях лайнблот или вестернблот, с помощью которого можно выявлять антитела к высокоспецифичным белкам возбудителя, разделенным по молекулярному весу с помощью электрофореза. Данный способ помогает безошибочно со 100% чувствительностью и 100% специфичностью подтвердить наличие заболевания.
Иммуноблотинг дает возможность определять спектр специфических антител IgM и IgG классов, которые синтезируются у больного к различным антигенам боррелий. При проведении анализа результаты исследования учитываются по степени интенсивности окрашивания полосок­откликов антител на тестовой мембране с нанесенными антигенами, указывающих на наличие или отсутствие антител к тем или иным белкам возбудителя. Учет полосок ведется по каждому антигену с постановкой позитивного и негативного контролей. При обнаружении интенсивно окрашенных откликов антител на мембране результат считается «положительным»; при отсутствии – «отрицательным» и «сомнительным» или «неопределенным» при наличии слабых или неоднозначных откликов, которые не дают возможности достоверно констатировать отсутствие или наличие антител.
Согласно рекомендациям Второй национальной конференции по серологической диагностике болезни Лайма и Center for Diseases Control (CDC) (США) [7], положительным результат определения IgM антител в иммуноблоте следует считать положительным при выявлении двух из трех полос антигенов с молекулярным весом: 25 kDa (OspC), 39 kDa (BmpA) и флагеллин – 41 kDa (Fla). Среди них, пожалуй,
основной – это OspC p25, который при положительной реакции позволяет интерпретировать результат, как «острая» инфекция. Для регистрации положительного результата выявления IgG антител в иммуноблоте требуется определять не менее пяти положительных полос из десяти с антигенамами со следующим молекулярным весом: 18 kDa, 25 kDa (OspC), 28 kDa, 30 kDa, 39 kDa (BmpA), 41 kDa (Fla), 45 kDa, 58 kDa (не GroEL), 66 kDa и 93 kDa. Однако, данные рекомендации не совсем подходят для России, поскольку это обусловлено антигенной гетерогенностью штаммов и видов B. burgdorferi sensu lato. В настоящий момент считается, что некоторые из антигенов боррелий важны для детекции специфических IgG антител: Osp17, р21, p39, p41, p66, p83/100 (p93) из штаммов B. afzelii; p14, p41, p93 из штаммов B. Garinii; OspA, OspC, p93 из штаммов B. burgdorferi sensu stricto. Наиболее часто специфические IgM антитела в иммуноблоте обнаруживают к антигенам p18, OspC, p39, p41 из штаммов B. afzelii; p39, p41, p66, p83 из штаммов B. Garinii; OspC, OspA из штаммов B. burgdorferi sensu stricto. Одной из сложностей интерпретации результатов иммуноблота является то, что спектр антител к различным антигенам может варьировать в зависимости от стадии инфекции [8, 9]. Для подтверждения положительного результата анализ с использованием иммуноблота следует повторить через 3–6 недель. На настоящее время иммуноблот достаточно широко используется для выявления специфических антител в ликворе [10].

Диагностика иксодового клещевого боррелиоза осуществляется на основе комплексной оценки клинических данных и результатов лабораторных исследований. Выбор адекватных диагностических методов зависит от информативности, чувствительности и специфичности применяемых тестов. Своевременная и точная лабораторная диагностика клещевого боррелиоза базируется на использовании комплекса взаимодополняющих методов, основанных на различных подходах к выявлению в биологических средах маркеров возбудителя боррелиоза с учетом особенностей развития и тяжести течения заболевания, а также региональных особенностей B. burgdorferi. Оптимальная схема диагностики поможет определиться с тактикой адекватной терапии для обеспечения, в дальнейшем, благоприятного исхода заболевания.
Список литературы находится в редакции

Источник

Borrelia burgdorferi, IgM, титр

Тест выявляет титр антител IgM против бактерии Borrelia burgdorferi, которая вызывает клещевой боррелиоз (болезнь Лайма).

Антитела класса IgM к Borrelia burgdorferi, иммуноглобулины класса M к возбудителю боррелиоза (болезни Лайма, клещевого боррелиоза, лайм-боррелиоза).

Anti-Borrelia burgdorferi IgM, B. burgdorferi antibodies, IgM, Lyme Disease antibodies (IgM).

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Этот тест выявляет антитела к Borrelia burgdorferi, которые вырабатываются организмом человека в ответ на заражение. То есть их наличие означает, что человек был инфицирован этими бактериями.

B. burgdorferi относится к группе спирохет и вызывает у человека клещевой боррелиоз (болезнь Лайма).

Человек заражается, если его укусил клещ, который сам был инфицирован B. burgdorferi. Иксодовые клещи, переносчики боррелиоза, – это самая распространённая группа клещей, в умеренном поясе Северного полушария они встречаются повсеместно. Чаще всего заражение людей происходит в период активности клещей – весной и летом.

Инкубационный период боррелиоза составляет несколько недель. На ранних стадиях могут наблюдаться следующие симптомы: усталость, озноб, головные боли. Также при боррелиозе иногда возникает характерная сыпь – мигрирующая эритема (кольцевидное покраснение кожи, которое постепенно расширяется). Если болезнь не лечить, то могут возникнуть серьёзные проблемы: боль в суставах, менингит, онемение конечностей, паралич лицевого нерва, расстройства памяти и (в редких случаях) поражения глаз и сердца. Лечение болезни, как правило, эффективно.

При инфицировании лимфоциты человека начинают вырабатывать антитела – специальные белки (иммуноглобулины), которые должны нейтрализовать бактерии. Иммуноглобулины M (IgM) появляются в крови первыми, через несколько дней после заражения. Однако выявить их удаётся обычно на более поздних сроках (через 2-3 недели). Примерно через 6 недель концентрация антител достигает максимума и затем постепенно уменьшается. Антитела другого типа – иммуноглобулины G (IgG) – появляются обычно немного позже и присутствуют в крови дольше.

Таким образом, антитела IgM лучше всего подходят для диагностики недавнего заражения.

Количество антител выражают в виде титра. Титр антител – это максимальное разбавление раствора, при котором в нём ещё обнаруживаются антитела. Например, титр 1:16 означает, что, если сыворотку крови разбавить в 16 раз, в ней ещё можно обнаружить антитела (а если разбавить сильнее – то антитела уже не детектируются).

Титр называют высоким (например, 1:612) или низким (например, 1:4).

Высокий титр является более достоверным. При этом важно помнить, что это не то же самое, что тяжесть заболевания. Ведь речь идёт не о количестве бактерий, а о количестве антител против них.

Тест на антитела рекомендуется проводить в два этапа. Первый шаг – это определение титра антител IgM и IgG. Если результат положительный или неоднозначный, то нужно сдать еще один анализ – вестерн-блоттинг (иммуноблот).

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

Тест проводят, когда у человека обнаруживаются симптомы клещевого боррелиоза. На ранних стадиях могут отмечаться:

Дополнительным показанием к анализу является укус клеща (за несколько дней или недель до появления первых симптомов). Важно помнить, что иногда он остаётся незамеченным. Но в ряде случаев даже удается проверить на B. burgdorferi самого клеща. Если результат положителен (т. е. клещ является переносчиком боррелиоза), то укушенному человеку следует сдать анализ самому. При этом обнаружить антитела можно будет через несколько недель.

Симптомы боррелиоза на более поздних стадиях:

Кроме того, анализ назначается после проведённого лечения, чтобы оценить его успешность.

Что означают результаты?

КП (коэффициент позитивности): 0 — 0,89.

Причины отрицательного результата

Причины положительного результата

Что может влиять на результат?

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, инфекционист, невропатолог, ревматолог.

Подписка на новости

Оставьте ваш E-mail и получайте новости, а также эксклюзивные предложения от лаборатории KDLmed

Источник

Антитела к боррелии lgM, Borrelia burg. IgM (болезнь Лайма) колич.

Описание

Антитела к боррелии lgM, Borrelia burg. IgM (болезнь Лайма) количественный — количественное определение IgM антител к возбудителю боррелиоза (Borrelia burgdorferi, болезни Лайма), которые свидетельствуют о ранней фазе инфицирования спирохетами Borrelia.

Болезнь Лайма (клещевой боррелиоз) — инфекционное заболевание, которое вызывается спирохетами Borrelia burgdorferi (единственная из всех Borrelia, патогенная для человека) и передаётся клещами. Путь передачи — укус клеща, который сам был инфицирован B. burgdorferi.

Клиническая картина при болезни Лайма
Благоприятным временем для развития заболевания считается весенне-летний период.

Антитела к Borrelia burgdorferi
При инфицировании, лимфоциты вырабатывают иммуноглобулины — специальные белки, нейтрализующие бактерии. Первыми в крови синтезируются иммуноглобулины класса M (IgM). Они выявляются через 2–3 недели после укуса клеща, достигая своего максимума через 6 недель, а затем их уровень постепенно снижается в течение нескольких месяцев и даже лет. Исследование на IgM оптимально проводить для диагностики недавнего заражения (в течение 1–2 месяцев после первых симптомов).

Отрицательный результат серологических исследований на ранних стадиях не является подтверждением отсутствия инфекции, что говорит о необходимости проведения исследования в динамике через 2–4 недели. На диссеминированной и хронической стадиях специфические антитела к возбудителю имеются практически всегда. Антитела класса IgG циркулируют в крови от нескольких месяцев до нескольких лет, даже после проведения эффективной антимикробной терапии и излечения инфекции.

Таким образом, по присутствию и титру антител об эффективности лечения судить нельзя. Иммунитет против Borrelia burgdorferi не является стерильным. Переболевшие особи могут повторно заразится через несколько лет. Обнаружение антител к Borrelia burgdorferi не всегда сопровождается клиническими признаками болезни Лайма. По результатам, специфичность ИФА исследования антител к Borrelia burgdorferi составляет 95% (т. е. неспецифические реакции, перекрёстное реагирование с антигенами других бактерий приблизительно в 5% случаев дают ложноположительные результаты).

При сомнительных результатах для подтверждения ИФА-тестов используют иммуноблот.

Источник

Иммуноблот к боррелиям IgM

Развернутое исследование антител класса IgM к антигенам боррелий методом Вестерн-блота.

Диагностирование боррелиоза, болезни Лайма на ранних стадиях в основном основано на характерных клинических проявлениях, главная из которых эритема мигрирующего характера. Однако, приблизительно 20-45% больных может переносить заболевание в безэритемной форме. В таких случаях, диагностика по клиническим показаниям совершенно невозможна.

Современная серологическая методика исследования довольно часто является лучшим способом для установки диагноза, однако информативность серологического теста боррелиоза имеет, к большому сожалению, серьезные ограничения. Выявление IgM класса методом ИФА при серологическом тестировании инфекции боррелиоза зачастую выдает тяжело определяемые ответы. У определенной части больных наблюдается продолжительное персистирование IgM антител, не всегда таким образом отражающие свежие данные. Боррелиозная инфекция на поздней стадии с позитивным результатом исследования IgM не позволяет получить дополнительный объем важной информации. Что касается распространенности антител к боррелии в нормальной степени популяции, то здесь все зависит от региона, и у лиц, работающих в лесных зонах, она может составлять до 40%.

Антитела класса IgM в редких случаях могут быть выявлены спустя много лет после возникновения инфекции или после терапии антибиотиками.

Причинный фактор ложноположительных данных анализов может остаться невыясненным. Наряду с этим, негативный результат по IgM не является исключением присутствия свежей инфекции, у ряда пациентов с инфекцией текущего характера отмечается серонегативность (отрицательный ответ при тестировании специфических IgM и/или IgG). Наблюдаются случаи расхождения полученных результатов тестирования антител к Borrelia burgdorferi тест-системами различных производителей, что напрямую зависит от специфичности применяемых антигенов и чувствительности систем. Так, в диагностировании боррелиоза нередко возникает необходимость в дополнительных серологических тестах, способных дать максимально исчерпывающую информацию при наличии неясной клинической картины или результатах исследования IgM и IgG методом ИФА, вызывающих серьезные сомнения.

Анализ IgM антител к инфекции боррелии методом Вестерн-блота дает возможность получить развернутый и подробный результат по присутствию антиген OspC p25, который представляет собой маркер свежих данных. Выявление IgM антител против разного рода специфичных антигенов инфекции боррелии, при отсутствии антител к OspC, не является достаточным свидетельством недавно возникшего инфицирования. Для установки диагноза свежего боррелиозного инфицирования, полученный позитивный ответ по IgM-антителам необходимо подтвердить примерно через 3-6 недель позитивным результатом по антителам класса IgG на свежесобранном образце крови. Поставщик антигенов в данном тесте – белки из экстракта специально подобранного штамма Borrelia afzelii и рекомбинантный антиген VisE.

Источник

Интерпретация Анализов боррелиоз

ANTI-BORRELIA IgG (БЛОТ)
Антиген VisE ПОЛОЖИТ. Специфичен
Белок мембранных везикул р83 ОТРИЦАТ. Специфичен
BmpA, р39 ОТРИЦАТ. Специфичен
OspA, р31 ОТРИЦАТ. Специфичен
р 30 СЛАБОПОЛ Специфичен
OspC, р25, маркер свежей инфекции ОТРИЦАТ. Специфичен
р 21 ОТРИЦАТ. Специфичен
р 19 ОТРИЦАТ. Специфичен
р 17 ОТРИЦАТ. Специфичен
ЗАКЛЮЧЕНИЕ СМ. КОММ Антитела класса G к Borrelia выявлены к антигенам VlsE и p 30.
Результат: положительный.

ANTI-BORRELIA IgM (БЛОТ)
Антиген VisE ОТРИЦАТ. Специфичен
Белок мембранных везикул р83 ОТРИЦАТ. Специфичен
BmpA, р39 ОТРИЦАТ. Специфичен
OspA, р31 ОТРИЦАТ. Специфичен
р 30 ОТРИЦАТ. Специфичен
OspC, р25, маркер свежей инфекции ОТРИЦАТ. Специфичен
р 21 ОТРИЦАТ. Специфичен
р 19 ОТРИЦАТ. Специфичен
р 17 ОТРИЦАТ. Специфичен
ЗАКЛЮЧЕНИЕ СМ. КОММ Антитела класса M к антигенам Borrelia не выявлены.

На сервисе СпросиВрача доступна консультация инфекциониста онлайн по любой волнующей Вас проблеме. Врачи-эксперты оказывают консультации круглосуточно и бесплатно. Задайте свой вопрос и получите ответ сразу же!

Источник